產(chǎn)品說明書
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Hieff? Multiplex PCR Master Mix | 13280ES60 | 100 T | 875.00 |
Hieff? Multiplex PCR Master Mix | 13280ES76 | 500 T | 3165.00 |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品適用于多重PCR實(shí)驗(yàn)。Hieff? Multiplex PCR Master Mix為多重PCR酶制劑與擴(kuò)增緩沖液的2×預(yù)混液，可以快速便捷地用于PCR反應(yīng)，具備高均一性、高特異性和高靈敏度的特點(diǎn)，可以對20對及以上的引物進(jìn)行特異、均一地進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
13280ES60 (100T) | 13280ES76 (500T) | ||
13280-A | Hieff? Multiplex PCR Master Mix | 2×1.25 mL | 10×1.25 mL |
運(yùn)輸與保存方式
冰袋運(yùn)輸。-20℃儲(chǔ)存，有效期1年。
反應(yīng)體系
組分 | 體積 μL | 終濃度 |
Hieff? Multiplex PCR Master Mix | 25 | 1× |
Primer mix | x | 0.1 μM-0.5 μM |
模板DNA | DNA總量：1 ng-200 ng | - |
無菌超純水 | up to 50 | - |
【注】：
1）上表中DNA量和引物濃度均為推薦濃度，可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行調(diào)整最適濃度。
2）每條引物的濃度可在0.1 μM-0.5 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。
3）Hieff? Multiplex PCR Master Mix中已經(jīng)包含擴(kuò)增所需要的酶、dNTP、鹽離子等，無需額外添加。
擴(kuò)增程序
循環(huán)步驟 | 溫度（℃） | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 | 1 min | 1 |
變性 | 94 | 30 sec | 15-45 |
退火 | 50-60 | 60 sec | |
延伸 | 72 | 60 sec/kb | |
終延伸 | 72 | 10 min | 1 |
【注】：
1）在PCR儀上設(shè)置上表中的反應(yīng)程序進(jìn)行多重PCR反應(yīng)（設(shè)置熱蓋溫度至105℃左右）。
2）使用本產(chǎn)品獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物無需添加上樣緩沖液，可直接上樣用于電泳檢測。
3）延伸時(shí)間以最長擴(kuò)增片段為準(zhǔn)，可適當(dāng)延長延伸時(shí)間，但要避免過長時(shí)間的延伸帶來的非特異性擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)案例分享
以人基因組DNA為模板，使用10對引物進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，分別擴(kuò)增97 bp、139 bp、181 bp、212 bp、268 bp、331 bp、415 bp、507 bp、741 bp和1172 bp的目的片段。
反應(yīng)體系配制
組分 | 體積 （μL） | 終濃度 |
Hieff? Multiplex PCR Master Mix | 25 | 1× |
Primer mix | x | 0.1 μM-0.5 μM |
模板DNA | DNA總量：1 ng-200 ng | - |
無菌超純水 | up to 50 | - |
擴(kuò)增程序
循環(huán)步驟 | 溫度（℃） | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 | 1 min | 1 |
變性 | 94 | 30 sec | 35 |
退火 | 60 | 60 sec | |
延伸 | 72 | 60 sec/kb | |
終延伸 | 72 | 10 min | 1 |
電泳檢測
2%瓊脂糖凝膠；電壓130 V；電泳時(shí)間30 min。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
M：100 bp DNA ladder
Lane1-2：10重PCR產(chǎn)物
HB200511
