Mouse IL-17A ELISA Kit 小鼠IL-17A ELISA試劑盒
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
白細(xì)胞介素17（IL-17）家族蛋白包括六個(gè)成員（IL-17/IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E/IL-25和IL-17F），是分泌的結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白，在C末端附近共享保守的胱氨酸結(jié)折疊，但在N末端具有相當(dāng)大的序列差異。除了作為非共價(jià)連接二聚體存在的IL-17B外，所有IL-17家族成員都是二硫鍵連接的二聚體。IL-17家族蛋白是誘導(dǎo)局部細(xì)胞因子產(chǎn)生并參與免疫功能調(diào)節(jié)的促炎細(xì)胞因子。IL-17調(diào)節(jié)NF-κB和促分裂原活化蛋白激酶的活性。這種細(xì)胞因子可以刺激IL6和環(huán)氧合酶-2（PTGS2/COX-2）的表達(dá)，并增強(qiáng)一氧化氮（NO）的產(chǎn)生。高水平的IL-17與幾種慢性炎癥性疾病有關(guān)，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病和多發(fā)性硬化癥。
翌圣Mouse IL-17A/F Heterodimer ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，用于定量測(cè)定血清、血漿中的小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白(Mouse IL-17A/F Heterodimer)。特異性抗小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本，經(jīng)過(guò)孵育，樣本中存在的小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測(cè)抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)570 - 630 nm)測(cè)定吸光度值。
產(chǎn)品信息
|
貨號(hào) |
98010ES48 / 98010ES96 |
|
規(guī)格 |
48 T / 96 T |
|
檢測(cè)范圍 |
46.88-3000 pg/mL |
|
檢測(cè)方法 |
雙抗夾心法 |
|
檢測(cè)物種 |
小鼠 |
|
檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) |
4.5小時(shí) |
|
靈敏度 |
12.18 pg/mL |
|
稀釋線性 |
80 - 124% |
|
回收率 |
78 - 122% |
|
板內(nèi)差 |
4.9% |
|
板間差 |
6.6% |
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
- 標(biāo)曲數(shù)據(jù)
|
濃度（pg/mL） |
顯色值 |
平均值 |
校準(zhǔn)值 |
|
|
3000 |
2.032 |
2.086 |
2.059 |
2.057 |
|
1500 |
1.263 |
1.283 |
1.273 |
1.283 |
|
750 |
0.738 |
0.784 |
0.761 |
0.744 |
|
375 |
0.381 |
0.430 |
0.406 |
0.413 |
|
187.5 |
0.203 |
0.237 |
0.220 |
0.224 |
|
93.75 |
0.112 |
0.125 |
0.118 |
0.121 |
|
46.88 |
0.068 |
0.069 |
0.069 |
0.067 |
|
0 |
0.011 |
0.010 |
0.010 |
/ |
數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。
標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
- 靈敏度檢測(cè)
IL-17A/F Heterodimer的最低檢測(cè)限為12.18 pg/mL，通過(guò)使用重復(fù)檢測(cè)20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。
- 精密度檢測(cè)
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測(cè)定6次，評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測(cè)20次，評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。
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項(xiàng)目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
||||
|
樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
6 |
6 |
6 |
20 |
20 |
20 |
|
|
平均值 |
1398.32 |
321.12 |
77.48 |
1403.42 |
325.91 |
77.59 |
|
標(biāo)準(zhǔn)差 |
87.86 |
16.57 |
2.44 |
105.95 |
19.59 |
4.86 |
|
變異系數(shù)（%） |
6.3 |
5.2 |
3.2 |
7.5 |
6.0 |
6.3 |
- 回收率檢測(cè)
通過(guò)不同水平的IL-17A/F Heterodimer添加于樣本中來(lái)測(cè)定回收率，其回收率如下:
|
樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
|
血清 |
97.4 |
90.7-106.1 |
|
血漿 |
99.9 |
78.4-122.6 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
92.1 |
82.7-107.5 |
- 稀釋線性檢測(cè)
|
血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
110.5 |
98.6-124.4 |
|
1:04 |
107.2 |
89.0-120.3 |
|
1:08 |
105.8 |
95.4-111.4 |
|
1:16 |
99.7 |
84.4-108.6 |
|
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
97.1 |
95.3-100.2 |
|
1:04 |
91.0 |
80.4-99.0 |
|
1:08 |
86.8 |
79.6-95.1 |
|
1:16 |
89.3 |
87.0-91.7 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
102.2 |
98.4-106.5 |
|
1:04 |
99.1 |
93.8-102.6 |
|
1:08 |
95.8 |
90.2-102.8 |
|
1:16 |
92.5 |
86.2-97.3 |
- 樣本值
應(yīng)用本試劑盒，檢測(cè)若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
|
樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（pg/mL） |
樣本值（pg/mL） |
|
血清 |
6 |
n.d. |
n.d. |
|
血漿 |
4 |
64.5 |
n.d.-132.6 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測(cè)范圍內(nèi)得46.88 pg/mL
- 測(cè)定特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白。下述因子進(jìn)行了特異性的評(píng)估，沒(méi)有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
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GM-CSF |
IL-10 |
GM-CSF |
|
IFN-γ |
IL-12 |
IFN-γ |
|
IL-1α |
IL-17A |
IL-1α |
|
IL-1β |
IL-18 |
IL-1β |
|
IL-2 |
IL-23 |
IL-4 |
|
IL-4 |
TNF-α |
IL-6 |
|
IL-5 |
|
IL-10 |
|
IL-6 |
|
TNF-α |
檢測(cè)簡(jiǎn)圖
疑問(wèn)解答
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問(wèn)題 |
造成原因 |
解決方法 |
|
標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器，按時(shí)校準(zhǔn)，仔細(xì)操作，充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
|
稀釋方法不恰當(dāng) |
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顯色值偏低 |
孵育時(shí)間太短 |
給予足夠的孵育時(shí)間，樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機(jī)，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |
