產(chǎn)品說明書
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡介
IL-1又稱為淋巴細(xì)胞刺激因子，細(xì)胞來源主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，主要存在形式為IL-1α和IL-1β，在體內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。IL-1α作為IL-1家族主要成員，還可在上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，參與各種免疫反應(yīng)、炎癥過程和造血。可通過多種刺激在造血細(xì)胞和非造血細(xì)胞中上調(diào)。在非造血細(xì)胞中，IL-1α以TAK1依賴的方式通過髓系細(xì)胞上的IL1R發(fā)出信號(hào)，以誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。IL-1α也在病毒、真菌或原生動(dòng)物感染后中性粒細(xì)胞的募集和宿主防御中發(fā)揮作用。IL-1α產(chǎn)生的失調(diào)與許多自身炎癥性疾病相關(guān)，目前白介素1α的治療潛力被科研人員關(guān)注，越來越多的臨床試驗(yàn)將它們作為治療藥物和靶點(diǎn)。
翌圣Mouse IL-1α ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿中的小鼠白介素1α(Mouse IL-1α)。特異性抗小鼠白介素1α抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的小鼠白介素1α與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中小鼠白介素1α的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
98012ES48 / 98012ES96 |
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規(guī)格 |
48 T / 96 T |
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檢測范圍 |
15.63-1000 pg/mL |
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檢測方法 |
雙抗夾心法 |
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檢測物種 |
小鼠 |
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檢測時(shí)長 |
4.5小時(shí) |
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靈敏度 |
6.64 pg/mL |
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稀釋線性 |
84 - 125% |
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回收率 |
74 - 111% |
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板內(nèi)差 |
5.3% |
|
板間差 |
5.9% |
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濃度（pg/mL） |
顯色值 |
平均值 |
校準(zhǔn)值 |
|
|
1000 |
2.719 |
2.785 |
2.752 |
2.752 |
|
500 |
1.794 |
1.769 |
1.782 |
1.783 |
|
250 |
1.097 |
1.017 |
1.057 |
1.054 |
|
125 |
0.611 |
0.570 |
0.590 |
0.592 |
|
62.5 |
0.342 |
0.309 |
0.325 |
0.328 |
|
31.25 |
0.197 |
0.180 |
0.189 |
0.188 |
|
15.63 |
0.125 |
0.113 |
0.119 |
0.115 |
|
0 |
0.040 |
0.039 |
0.040 |
/ |
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
- 標(biāo)曲數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。
標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
- 靈敏度檢測
IL-1α的最低檢測限為6.64 pg/mL，通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。
- 精密度檢測
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定8次，評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測24次，評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。
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項(xiàng)目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
||||
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樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
8 |
8 |
8 |
24 |
24 |
24 |
|
|
平均值 |
457.5 |
107.3 |
28.3 |
463.6 |
105.7 |
29.4 |
|
標(biāo)準(zhǔn)差 |
28.1 |
4.5 |
1.5 |
32.1 |
4.0 |
2.0 |
|
變異系數(shù)（%） |
6.1 |
4.2 |
5.5 |
6.9 |
3.8 |
6.9 |
- 回收率檢測
通過不同水平的IL-1α添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:
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樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
|
血清 |
94.6 |
78.0-110.9 |
|
血漿 |
80.9 |
73.7-89.8 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
95.8 |
78.5-104.8 |
- 稀釋線性檢測
|
血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
98.6 |
91.0-105.7 |
|
1:04 |
107.2 |
110.3-105.9 |
|
1:08 |
117.5 |
114.5-121.6 |
|
1:16 |
103.7 |
98.4-107.4 |
|
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
94.5 |
83.8-103.3 |
|
1:04 |
109.3 |
98.0-120.1 |
|
1:08 |
112.2 |
111.5-112.8 |
|
1:16 |
110.5 |
103.3-124.8 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
102.7 |
92.2-114.2 |
|
1:04 |
111.4 |
103.5-115.8 |
|
1:08 |
107.5 |
104.6-109.1 |
|
1:16 |
101.7 |
98.2-106.6 |
- 樣本值
應(yīng)用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
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樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（pg/mL） |
樣本值（pg/mL） |
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血清 |
8 |
n.d. |
n.d. |
|
血漿 |
8 |
n.d. |
n.d. |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得15.63 pg/mL
- 測定特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組小鼠白介素1α。下述因子進(jìn)行了特異性的評(píng)估，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
Recombinant Rat: |
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IFN-γ |
IL-6 |
IFN-γ |
IL-6 |
IFN-γ |
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IL-1α |
IL-10 |
IL-1β |
IL-10 |
IL-1β |
|
IL-1β |
IL-12 |
IL-1ra |
IL-13 |
IL-2 |
|
IL-1ra |
IL-13 |
IL-2 |
IL-21 |
IL-4 |
|
IL-2 |
IL-16 |
IL-4 |
IL-22 |
IL-6 |
|
IL-4 |
IL-17 |
IL-5 |
|
IL-10 |
|
IL-5 |
IL-22 |
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檢測簡圖
疑問解答
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問題 |
造成原因 |
解決方法 |
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標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器，按時(shí)校準(zhǔn)，仔細(xì)操作，充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
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稀釋方法不恰當(dāng) |
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顯色值偏低 |
孵育時(shí)間太短 |
給予足夠的孵育時(shí)間，樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機(jī)，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |
