產(chǎn)品描述

根據(jù)生物學(xué)功能及細(xì)胞表面的抗原表達(dá)，可以將人外周血淋巴細(xì)胞分為三群：T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞的作用主要是參與特異抗原介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，并調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞分泌免疫球蛋白。T淋巴細(xì)胞按其功能又可進(jìn)一步分為輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞和抑制/細(xì)胞毒性T細(xì)胞。NK細(xì)胞，即自然殺傷細(xì)胞，介導(dǎo)對(duì)某些腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，而不依賴于MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子的存在。

人淋巴細(xì)胞亞群分析試劑盒是由一系列雙色熒光標(biāo)記抗體組成的試劑盒，主要用于檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞各亞群占總淋巴細(xì)胞的百分率，即成熟T淋巴細(xì)胞（CD3＋）、輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞（Th/i :CD3＋CD4＋）、抑制/細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Ts/c: CD3＋CD8＋）、B淋巴細(xì)胞（CD19＋）和NK細(xì)胞（CD3－CD16＋和/或CD56＋）；還可以計(jì)算出Th/Ts（CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋）細(xì)胞的比例。

相對(duì)于傳統(tǒng)的分析淋巴細(xì)胞亞群的方法，流式細(xì)胞術(shù)將抗體的特異性和流式細(xì)胞儀分析單個(gè)細(xì)胞的敏感性結(jié)合起來，使得這一分析方法更精確、更簡(jiǎn)便。

 

產(chǎn)品組分

編號(hào)	組分	產(chǎn)品規(guī)格
40404-A	MIgG2a-FITC/MIgG1-PE	1 mL
40404-B	CD45-FITC/CD14-PE	1 mL
40404-C	CD3-FITC/CD19-PE	1 mL
40404-D	CD3-FITC/CD4-PE	1 mL
40404-E	CD3-FITC/CD8-PE	1 mL
40404-F	CD3-FITC/CD16-PE/CD56-PE	1 mL
40404-G	10×RBC Lysing Buffer	2×30 mL

 

運(yùn)輸和保存方法

運(yùn)輸方式：冰袋運(yùn)輸

保存方式：4℃避光保存，嚴(yán)禁凍存，避免直接暴露于光線下。

 

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）孵育時(shí)間、溫度及離心時(shí)間應(yīng)參考操作說明，否則可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3）服用免疫抑制劑的患者其結(jié)果可能會(huì)異常。

4）溶血標(biāo)本不能用本試劑盒檢測(cè)。

5）抗體試劑中均含有防腐劑疊氮鈉，是一種有毒物質(zhì)，操作時(shí)避免與皮膚、粘膜接觸。

6）本試劑盒只對(duì)人的標(biāo)本做過檢測(cè)，未對(duì)其它的物種進(jìn)行檢測(cè)。

7）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

產(chǎn)品應(yīng)用

試劑40404-A：MIgG2a-FITC/MIgG1-PE，同型對(duì)照；用于設(shè)定陰性范圍，消除非特異性熒光的干擾。

試劑40404-B：CD45-FITC/CD14-PE，用于淋巴細(xì)胞圈門。CD45-FITC，識(shí)別所有白細(xì)胞；CD14-PE，識(shí)別人單核細(xì)胞及少量粒細(xì)胞。

試劑40404-C：CD3-FITC/CD19-PE，用于確定T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的百分率。CD3-FITC，識(shí)別所有成熟T淋巴細(xì)胞；CD19-PE識(shí)別所有B淋巴細(xì)胞。

試劑40404-D：CD3-FITC/CD4-PE，用于確定輔助性T淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+）占總淋巴細(xì)胞的百分率；CD4-PE，識(shí)別輔助性T細(xì)胞（Th/i）及單核細(xì)胞。

試劑40404-E：CD3-FITC/CD8-PE，用于確定抑制性T淋巴細(xì)胞（CD3+CD8+）占總淋巴細(xì)胞的百分率；CD8-PE，識(shí)別抑制性T細(xì)胞（Ts/c）及NK細(xì)胞。

試劑40404-F：CD3-FITC/CD16-PE/CD56-PE，用于確定T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的百分率；CD16與CD56抗體識(shí)別NK細(xì)胞。

 

使用方法

1 標(biāo)本的采集與制備

EDTA抗凝的靜脈血（至少1 mL），建議標(biāo)本在采集后6 h內(nèi)進(jìn)行染色分析。檢測(cè)的外周血白細(xì)胞濃度在3.0×10³~10.0×10³個(gè)/μL。（若高于10.0×10³個(gè)/μL，則需要稀釋血標(biāo)本；若低于10.0×10³個(gè)/μL，則需要增加標(biāo)本量或分離白細(xì)胞）

2 紅細(xì)胞裂解液的稀釋

用去離子水稀釋溶液40404-G到1×工作液，紅細(xì)胞裂解液的溶血效力受溫度影響，使用前要預(yù)先平衡至室溫（20℃~25℃）。

【注】稀釋后避光室溫保存，根據(jù)每次所需量進(jìn)行稀釋。

3 染色及固定細(xì)胞

1）每份病人標(biāo)本用六根12×75 mm流式管，分別標(biāo)上樣品編號(hào)（1、2、3……）和管號(hào)（A、B、C、D、E、F）。

2）取20 μL試劑A加入到每份樣品的A管中，取20 μL試劑B加入到每份樣品的B管中，取20 μL試劑C加入到每份樣品的C管中，取20 μL試劑D加入到每份樣品的D管中，取20 μL試劑E加入到每份樣品的E管中，取20 μL試劑F加入到每份樣品的F管中。

3）向每份標(biāo)本的試管中加入100 μL抗凝全血，充分混勻，室溫（20℃~25℃）避光反應(yīng)20~30 min。

4）每管加入2 mL（1×）紅細(xì)胞裂解液（20℃~25℃），充分混勻，室溫避光反應(yīng)10~12 min，至液體透明。

5）1000 rpm離心5 min，棄上清。

6）加入2 mL PBS洗滌，1000 rpm離心5 min，棄上清。

7）加入0.5 mL 2%甲醛溶液固定細(xì)胞，混勻，24 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀分析。

【注】若細(xì)胞染色后立即上流式細(xì)胞儀分析，則不需要用甲醛固定，用0.5 mL PBS洗滌重懸細(xì)胞即可上機(jī)分析。

4 流式檢測(cè)

用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=488 nm；發(fā)射波長(zhǎng)Em=578 nm，PE的橙紅色熒光建議使用FL2通道檢測(cè)；FITC最大激發(fā)波長(zhǎng)為Ex=488 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)Em=525 nm，F(xiàn)ITC的綠色熒光在FL1通道檢測(cè)。使用試劑40404-A作為陰性對(duì)照，試劑40404-B用于淋巴細(xì)胞圈門。