產(chǎn)品描述

BCECF是一種比率型pH熒光指示探針，Ex=503 nm，Em=530 nm。聯(lián)合現(xiàn)代化的熒光成像技術(shù)，使其在涉及pH變化的多種實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用，如細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)，鈣調(diào)節(jié)，受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，鐵離子運(yùn)輸內(nèi)吞等。

BCECF,AM是BCECF基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。BCECF,AM本身沒有熒光，穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成BCECF，后者被滯留在細(xì)胞內(nèi)，隨pH變化發(fā)出綠色熒光。

產(chǎn)品性質(zhì)

英文名稱（English synonym）	2',7' -bis-(2-carboxyethyl)-5-(and-6)-carboxyfluorescein
外觀（Appearance）	類白色粉末
分子量（Mol. Wt.）	808.69
純度（Purity）	≥98%
溶解（Solubility）	溶于DMSO
Ex/ Em（nm）	503/528 nm
結(jié)構(gòu)式

運(yùn)輸與保存方法

室溫運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

注意事項(xiàng)

1）對(duì)于微量試劑，開封前，請(qǐng)稍微離心一下，以保證粉末落入管底。

2）由于BCECF,AM對(duì)濕度非常敏感，本粉末保存的過程中一定要保持干燥。對(duì)于配制好的BCECF,AM儲(chǔ)存液需要分裝凍存，且必須緊緊密封蓋子，干燥保存。

3）BCECF,AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法（該方案僅做參考，具體染色時(shí)需根據(jù)細(xì)胞類型，細(xì)胞狀態(tài)及其他條件進(jìn)行優(yōu)化。）

1. 儲(chǔ)存液的配制

加入高質(zhì)量無水DMSO將其配制成1-20 mM的儲(chǔ)存液。建議使用前進(jìn)行配制，暫時(shí)不用的儲(chǔ)存液務(wù)必按照每次使用量分裝后于≤-20℃避光凍存。避免反復(fù)凍融?。?！

2. 染色步驟

1）細(xì)胞準(zhǔn)備

按照96孔板每孔100 uL 4～8×104個(gè)細(xì)胞，384孔板每孔25 uL1～2×104個(gè)細(xì)胞對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鋪板使其過夜生長(zhǎng)。

注：對(duì)于不同的細(xì)胞需參照文獻(xiàn)對(duì)細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。

2）BCECF,AM工作液的配制

根據(jù)具體使用量，取適量上述配制的儲(chǔ)存液，用HHBS（Hanks and 20 mM Hepes buffer）緩沖液稀釋成2-50 µM工作液。

3）染色。

分別加入等體積的BCECF,AM染液（96孔板，每孔加入100 µL; 384孔板每孔加入25 µL），于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育30-60 min。

注：a. 染色液中不能含有血清，因?yàn)檠逯锌赡芎袃?nèi)源性酯酶活性，因此應(yīng)避免；

  b. 染色液中不能含有氨基酸，因?yàn)榇嬖诘闹房赡軙?huì)斷裂AM基團(tuán)，阻止染料的加載。

4）清洗

吸除染液，用HHBS清洗細(xì)胞2次。

5）加入適當(dāng)量復(fù)合物后觀察熒光強(qiáng)度變化。

使用合適熒光顯微鏡或帶有圖像分析系統(tǒng)的激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度?？捎?90 nm、430 nm激發(fā)波長(zhǎng)，530 nm發(fā)射波長(zhǎng)對(duì)其進(jìn)行比率測(cè)定。

HB180709