產(chǎn)品說明書
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COA
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產(chǎn)品簡介
Fluo-3, AM是一種常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針。它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3， 從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3游離配體幾乎是非熒光性的，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強(qiáng)。但是，當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，熒光會增加60至80倍，最大激發(fā)波長為506 nm，最大發(fā)射波長為526 nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488 nm左右，發(fā)射波長為525 - 530 nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。
組分信息
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組分名稱 |
40703ES50 |
40703ES72 |
40703ES80 |
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Fluo-3, AM (Powder) , Cell Permeant 細(xì)胞膜可滲透鈣離子熒光探針 |
50 μg |
5×50 μg |
1 mg |
產(chǎn)品性質(zhì)
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中文名稱（Chinese Synonym） |
鈣熒光探針Fluo-3, AM |
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CAS 號（CAS NO.） |
121714-22-5 |
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分子式（Molecular Fomular） |
C51H50Cl2N2O23 |
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分子量（Molecular Weight） |
1129.85 |
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Ex/Em（nm, Ca2+-bound） |
506/526 |
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純度（Purity） |
≥90% (HPLC) |
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外觀（Appearance） |
紅色粉末 |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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儲存條件
室溫運輸。-20℃避光干燥保存，可保存1年。
使用說明
- Fluo-3/AM儲存液的配制
利用高質(zhì)量無水DMSO溶解Fluo-3/AM配制成2 - 5 mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存，最長可保存6個月，但是避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。每次使用前需回溫至室溫。
- Fluo-3/AM工作液的配制
利用合適緩沖液（如HHBS）將Fluo-3/AM稀釋成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑probenecid（0.5 - 1 mM）。
注：① 對于大多數(shù)細(xì)胞系，建議最終濃度為4 - 5 μM的Fluo-3/AM。細(xì)胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗確定。
② Fluo-3/AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍存。
③ Pluronic F-127 可以防止Fluo-3/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
- 取出預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細(xì)胞3次。
注：如果使用含血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會降低Fluo-3/AM進(jìn)入細(xì)胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。
- 將 Fluo-3/AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。在37℃培養(yǎng)30 - 60 min。
- 用緩沖液（如HHBS）洗滌細(xì)胞 3 次，以充分去除殘留的Fluo-3/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細(xì)胞。
- 數(shù)字成像顯微鏡檢測細(xì)胞。
注：某些細(xì)胞具有自體熒光會影響結(jié)果分析，需使用未加載探針細(xì)胞做對照，在結(jié)果分析時在同一波長下扣除自熒光。
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethylester，AM）容易吸潮，從冰箱取出后，請確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底
5. 第一次使用時，建議母液現(xiàn)配現(xiàn)用。且溶解后的試劑盡可能在短時間內(nèi)使用，以保證實驗效果。
6. 母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并嚴(yán)格做到≤-20℃密封干燥保存。
7. 建議您在正式實驗前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時間等，找到最佳實驗條件。
Ver.CN20241124
