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      PI(Propidium Iodide) 碘化丙啶
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻
                  
       
      產(chǎn)品描述
      


      碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個DNA堿基對結(jié)合一個染料。PI也能與RNA結(jié)合，需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的最大激發(fā)/發(fā)射波長是493/636 nm。一旦與核酸結(jié)合，熒光信號明顯增強20-30倍，最大激發(fā)波長向紅色波段遷移~30-40 nm，最大發(fā)射波長向藍色波段遷移~15 nm，從而使其最大激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?35/617 nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標記抗體，只需要使用恰當?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細胞儀以及熒光計分析。
      


      PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定，用于細胞凋亡相關的研究。也可以用作多重熒光染色的復染劑，兼容于各種細胞標記技術，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進行細胞周期的檢測。
      



      
產(chǎn)品性質(zhì)
      


      
	
		
      
			
			
      英文同義名（English synonym）
      
			      		
			
			
      2,7-Diamino-9-phenyl-10 (diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide.
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      CAS號（CAS NO.）
      
			      		
			
			
      25535-16-4
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      分子式（Formula）
      
			      		
			
			
      C27H34I2N4
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      分子量（Molecular Weight）
      
			      		
			
			
      668.4
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      外觀（Appearance）
      
			      		
			
			
      暗紅色結(jié)晶
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      純度（Purity）
      
			      		
			
			
      ≥95% by HPLC
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      溶解性（Solubility）
      
			      		
			
			
      溶于水（1 mg/mL）
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      熒光光譜 （Fluorescence Spectral）
      
			      		
			
			
      水溶液，PI的Ex/Em=493/636 nm；PI-核酸的Ex/Em= 535/617nm；熒光可用氙氣燈，泵弧燈或者488nm氬離子激光激發(fā)。通常情況下，用流式細胞儀的FL2通道檢測。
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      結(jié)構(gòu)式（Structure）
      
			      		
			
			
      2222.png
      
			      		
		
      
	      

      



      
運輸與保存方法
      


      冰袋（wet ice）運輸。4 ºC避光保存，至少一年穩(wěn)定。
      



      
注意事項
      


      1）碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。
      


      2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
      


      3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
      


       
      


      使用方法
      


      1. 儲存液的配制
      


      稱取1 mg PI粉末（M. Wt= 668.4），用1ml去離子水充分溶解配成1 mg/mL（1.5 mM）的儲存液。4 ºC避光保存，至少6個月穩(wěn)定。
      


       
      


      2. 貼壁細胞復染步驟（熒光顯微鏡檢測）
      
1） 樣本準備：      根據(jù)自身樣本選擇合適步驟固定細胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復染要求細胞經(jīng)透化處理。
      
2） RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20 min；c，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1 min。
      
3） 復染：
      


      a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；
      


      b，直接用2×SSC稀釋1 mg/mL(1.5 mM)PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300 µL染液足夠用于一個蓋玻片細胞制片。染色1-5 min。
      


      c，2×SSC清洗幾次，流盡多余液體，加入抗淬滅劑封片(Yeasen,Cat#36308ES08)。
      


      d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
      


      3. 懸浮細胞復染步驟（流式細胞儀檢測）
      


      1）樣本準備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。或者使用如下的步驟：
      


      a. 收集細胞，密度約2×105~1×106。離心后吸除上清，輕彈管壁就剩下的液體重懸細胞。加入1 mL常溫存放的PBS；
      


      b. 將所有的重懸細胞轉(zhuǎn)移到4 mL于-20ºC預冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添加細胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20ºC乙醇中固定5-15 min。
      


      c. 離心收集細胞，除去乙醇。輕彈管壁以彈松細胞后，加入5mL室溫的PBS。允許細胞水化15 min；
      


      2）復染
      
a. 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀釋1 mg/mL（1.5 mM）PI儲存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1 mL的PI染色液足夠用于每個細胞樣本的檢測。
      


      【注】：工作液的使用濃度可以根據(jù)自身實驗體系調(diào)整，也可以直接使用PBS，HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲存液到需要的濃度。
      
b. 樣本制備的最后一步后離心收集細胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室溫孵育15 min后，流式細胞儀進行細胞分析。若用顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。
      


      4. 染色質(zhì)FISH復染步驟
      
1）樣本準備：      根據(jù)標準步驟制備樣本。復染之前的最后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖液。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。
      


      2）復染
      
a. 工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/mL(1.5 mM)的PI儲存液1:1000，得到1.5 µM的PI染色工作液。滴加300 µL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 µg/mL）?？墒褂盟芰仙w玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如果加入RNase則37ºC孵育。
      


      b. 去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結(jié)合的染料；
      
c. 用吸水紙圍繞樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片用石蠟或指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進行封片。
      
d. 選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
      



      
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      HB210524
      


       
      


       
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883