產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

Anti-Flag親和純化凝膠（20584ES）由高質(zhì)量的鼠源IgG2b單克隆抗體與4%高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠通過供價(jià)偶聯(lián)制備，本產(chǎn)品具有較高的Flag標(biāo)簽融合蛋白加載容量（至少為1.1 mg protein/mL凝膠），雜蛋白非特異結(jié)合少，可用于帶有Flag標(biāo)簽的融合蛋白免疫沉淀（IP）和純化。

Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag親和純化凝膠）可結(jié)合Met修飾的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。

 

 

產(chǎn)品性能

 

高特異性：選用高質(zhì)量的鼠源IgG2b單克隆抗體，能夠特異性吸附Flag蛋白序列。

高收率，高純度：得到高純度的Flag標(biāo)簽蛋白

高結(jié)合載量：載量≥1.1mg蛋白/mL凝膠

結(jié)合蛋白類型多：Met-FLAG-Protein，N端FLAG-Protein，C端FLAG-Protein

用途廣泛：可用于蛋白質(zhì)純化或IP

 

 

數(shù)據(jù)展示

 

1）產(chǎn)品性能驗(yàn)證：Anti-Flag親和純化凝膠(20584ES)純化原核表達(dá)的Met修飾的N端Flag融合蛋白，N端Flag融合蛋白，C端Flag融合蛋白。

 圖1.Yeasen Anti-Flag親和純化凝膠純化結(jié)果跑膠圖

a：Flag-N    b：Flag-M    c：Flag-C

M：蛋白Marker;1：發(fā)酵菌破碎上清原液；2：發(fā)酵菌破碎上清柱后穿透；3：洗脫（pH2.7洗脫1）；4：洗脫（pH2.7洗脫2）；5：洗脫（pH2.7洗脫3）；6：洗脫（pH2.7洗脫4）；7：純化后凝膠（pH2.7洗脫）；8：洗脫（pH12洗脫1）；9：洗脫（pH12洗脫2）；10：洗脫（pH12洗脫3）；11：洗脫（pH12洗脫4）；12：純化后凝膠（pH12洗脫）

 

2）翌圣Anti-Flag親和純化凝膠(20584ES)與國外進(jìn)口品牌S*純化對(duì)比測(cè)試。

圖2.Yeasen（a) PK進(jìn)口品牌S*(b)Anti-Flag凝膠對(duì)比測(cè)試跑膠圖

M：蛋白Marker；1：Flag-N蛋白柱前原液；2：Flag-N蛋白柱后穿透；3：洗脫（pH2.7洗脫）；4：洗脫（pH12洗脫）

 

圖3.Yeasen（a) PK進(jìn)口品牌S*(b)Anti-Flag凝膠每ml凝膠純化蛋白得率對(duì)比測(cè)試結(jié)果

 

結(jié)論：與進(jìn)口品牌S*對(duì)比，20584ES的載量和目的蛋白得率均明顯高于競(jìng)品。

 

3）翌圣Anti-Flag親和純化凝膠(20584ES)與品牌G*純化低表達(dá)量蛋白對(duì)比測(cè)試。

圖4.Yeasen Anti-Flag親和純化凝膠純化低表達(dá)量蛋白結(jié)果跑膠圖

a：Flag-N    b：Flag-M    c：Flag-C

M：蛋白Marker；1：Flag-C蛋白柱前原液；2：Flag-C蛋白柱后穿透；3：洗脫（pH2.7洗脫）；4：洗脫（pH12洗脫）5：洗脫（1×Flag多肽洗脫）;6：純化后凝膠（pH2.7洗脫）；7：純化后凝膠（pH12洗脫）；8：純化后凝膠（1×Flag多肽洗脫）

 

圖5.Yeasen（a) PK品牌G*(c)Anti-Flag凝膠對(duì)比測(cè)試跑膠圖

M：蛋白Marker；1：Flag-C蛋白柱前原液；2：Flag-C蛋白柱后穿透；3：洗脫（pH2.7洗脫）；4：洗脫（pH12洗脫）5：洗脫（1×Flag多肽洗脫）;6：純化后凝膠（pH2.7洗脫）；7：純化后凝膠（pH12洗脫）；8：純化后凝膠（1×Flag多肽洗脫）

 

結(jié)論：在目的蛋白表達(dá)量極低的條件下，我們凝膠得到的目的蛋白純度明顯優(yōu)于競(jìng)品。

 

 

 

常見問題

 

問題	可能原因	推薦解決方案
柱子反壓過高	填料被堵塞	清洗樹脂。
		裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前最好用0.22µm或0.45µm濾膜過濾，或離心去除。
	樣品太黏稠	樣品中含高濃度的核酸，延長破碎時(shí)間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5µg/ml），Mg2+(終濃度1mM)，冰上孵育10-15min
	緩沖液太黏稠	有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會(huì)引起反壓增高，降低操作流速。
洗脫組分中無目的蛋白	Flag標(biāo)簽蛋白變性了	過度的裂解使目的蛋白變性使用溫和的裂解條件，實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。
	洗脫方式不合適	建議更換洗脫方式，優(yōu)先選擇1×flag多肽競(jìng)爭(zhēng)洗脫。
	目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀	在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10mM
	融合蛋白改變了Flag的構(gòu)象，影響了目的蛋白的結(jié)合力	測(cè)定pGEX中Flag的結(jié)合力，對(duì)載體進(jìn)行超聲處理，檢測(cè)其結(jié)合力。如果載體中Flag有很高的親和力，有可能是改變?nèi)诤系鞍椎臉?gòu)象從而降低了Flag標(biāo)簽蛋白的親和力。
		降低結(jié)合溫度至4℃，充分清洗。
目的蛋白沒有完全洗脫下來	洗脫體積太少	增加洗脫液體積，減小洗脫流速。
	洗脫液中Gly-HCl的pH 發(fā)生改變	使用新鮮配制的洗脫液
	洗脫液孵育時(shí)間不夠	增加洗脫液與凝膠的孵育時(shí)間
電泳或western blot檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)多條帶	Flag融合蛋白已經(jīng)發(fā)生降解	在裂解液中加入蛋白酶抑制劑，如加入1 mM PMSF
		可能是蛋白酶對(duì)目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT）
	細(xì)胞破碎過度	減少細(xì)胞破碎時(shí)間，超聲前加入溶菌酶（菌液體積的0.1倍10mg/ml溶菌酶，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免發(fā)泡導(dǎo)致蛋白酶變性，過度超聲破碎增加宿主內(nèi)源蛋白與Flag融合目的蛋白的共純化。
	抗體與E. coli的各種蛋白反應(yīng)	抗體吸附E. coli蛋白：Flag-抗體；超聲處理去除Flag抗體，可以用Western Blot檢測(cè)

 

 

 

訂貨信息

 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格(mL)
Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag親和純化凝膠）	20584ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-HA Affinity Gel（Anti-HA親和純化凝膠）	20586ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-Myc Affinity Gel（Anti-Myc標(biāo)簽親和純化凝膠）	20587ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-V5 Affinity Gel（Anti-V5標(biāo)簽親和純化凝膠）	20588ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-His Affinity Gel（Anti-His標(biāo)簽親和純化凝膠）	20589ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-GFP MagBeads（Anti-GFP免疫磁珠)	20564ES03/08	1/5
Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads Anti-flag免疫磁珠	20565ES03/08	1/5
Anti-HA MagBeads（Anti-HA免疫磁珠）	20566ES03/08	1/5
Anti-Myc MagBeads（Anti-Myc免疫磁珠）	20567ES03/08	1/5