類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性炎癥性關(guān)節(jié)疾病，表現(xiàn)為持續(xù)性滑膜炎、全身性炎癥，伴有骨骼和軟骨侵蝕，最終可導(dǎo)致關(guān)節(jié)強直和畸形。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動物模型被廣泛用于發(fā)病機制和治療方法的研究。目前已經(jīng)建立多種動物模型用于研究RA的病因、發(fā)病機制、影響因素以及新的治療靶點的研究和新療法的評估。

RA動物模型大致可分為誘導(dǎo)型和轉(zhuǎn)基因型兩大類，常見的誘導(dǎo)模型有膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎（CIA）和佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（AA），轉(zhuǎn)基因小鼠模型有人TNF-α轉(zhuǎn)基因模型等。

弗氏佐劑(Freunds Adjuvant)由Jules Freund在20世紀40年代發(fā)明，它是將抗原水溶液與油劑等量混合，再加乳化劑制成油包水的抗原乳劑，是目前動物實驗中最常用的佐劑。

弗氏佐劑分為含結(jié)核桿菌的弗氏完全佐劑(Complete Freund's Adjuvant, CFA)和不含結(jié)核桿菌的弗氏不完全佐劑(Incomplete Freund's Adjuvant, IFA)，主要用來誘導(dǎo)小鼠膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎CIA模型和佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎AA模型。

（1）小鼠模型

膠原誘導(dǎo)性CIA模型是最廣泛使用的 RA 小鼠模型之一。用異源的Ⅱ型膠原免疫動物，可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生針對關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ型膠原的自身免疫反應(yīng)，臨床表現(xiàn)為多發(fā)性末梢關(guān)節(jié)炎。

造模方法：將牛二型膠原（CⅡ）溶于冰乙酸中，在4℃下攪拌至充分溶解并置4℃冰箱過夜，再將滅活的卡介苗（BCG），即已滅活的結(jié)核桿菌，置于液體石蠟中，配制成完全弗氏佐劑（complete Freund’s adjuvant，CFA），將二者等體積混合、乳化，制備成為Ⅱ型膠原乳劑。將該乳劑注射于小鼠尾根部皮內(nèi)0.1-0.2 mL，使小鼠引發(fā)炎癥，在注射后的第21日再于小鼠的腹腔中注射0.1-0.2 mL的Ⅱ型膠原乳劑作為激發(fā)注射。首次免疫注射后，小鼠會出現(xiàn)局部的炎癥刺激反應(yīng)，1周左右就會愈合；而致炎后的24天小鼠會出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹，從后足發(fā)展到前足再到尾部。

（2）大鼠模型

造模方法：將牛二型膠原（CⅡ）與不完全弗氏佐劑（Freund incomplete adjuvant，IFA）等量混勻乳化；第一天于大鼠多部位皮內(nèi)免疫注射，1周后腹腔注射加強免，二次免疫3-7天內(nèi)即可得到模型。在致敏7天后，踝關(guān)節(jié)會輕度腫脹和皮膚發(fā)紅，3周后癥狀加重，甚至皮膚發(fā)生潰瘍；5-6周后病理改變進一步加重，關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨質(zhì)均受血管翳的侵蝕和破壞。

AA 模型是最廣泛使用的大鼠 RA 模型，有不完全弗氏佐劑（Freund incomplete adjuvant,IFA）和完全弗氏佐劑（complete Freund’s adjuvant,CFA）兩種類型。

造模方法：于大鼠皮內(nèi)注射致炎，模型一般于致炎后10-20天出現(xiàn)續(xù)發(fā)炎性癥狀，約在20天達到高峰。炎癥表現(xiàn)以踝關(guān)節(jié)為重，可侵及足墊和全足。關(guān)節(jié)腫脹癥狀與臨床RA患者具有相似性，但會出現(xiàn)免疫功能紊亂現(xiàn)象。

1) 將牛二型膠原（CⅡ）溶于冰乙酸溶液中，濃度2 mg/mL，4℃過夜；

2) 弗氏不完全佐劑補加已滅活的結(jié)核桿菌，使其濃度達2-5 mg/mL，翌圣生物提供的60718ES弗氏完全佐劑中結(jié)核桿菌濃度小于10 mg/mL；

3) 將牛二型膠原（CⅡ）乙酸溶液與弗氏完全佐劑等量混合并乳化；

4）每只實驗小鼠背部取4-6點進行皮下注射，總共0.1-0.2 mL；

5）3周后用弗氏不完全佐劑，與牛二型膠原（CⅡ）乙酸溶液等量混合并乳化，每只小鼠尾根部取3-5點皮下注射，總共0.1-0.2 mL。

1）準備相關(guān)試劑，注意設(shè)置實驗組與對照組；

2）觀察記錄：一般在第二次免疫后7-12天小鼠80%以上出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥狀。根據(jù)小鼠關(guān)節(jié)部位紅腫及活動程度進行臨床癥狀分級，在實驗前和實驗后的第3，5，7，12天分別觀察記錄，等級區(qū)分參考如下：

3）小鼠測定：采用小鼠爪足體積測量計測定實驗前后小鼠后肢關(guān)節(jié)體積，測量每只小鼠后腿膝關(guān)節(jié)約5 mm以下體積，反復(fù)三次，記錄取平均值，體積大小與關(guān)節(jié)紅腫程度成正比，每三天檢測一次；

4）病理檢查：取實驗組和對照組小鼠，去外皮，4%甲醛固定48 h以上，5%硝酸脫鈣2 h，二甲苯浸潤，石蠟包埋。制成6 mm切片，HE染色，常規(guī)光學(xué)顯微鏡觀察，制定評分標準進行病理學(xué)診斷。

圖3.不同時間點各組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜和踝關(guān)節(jié)HE染色結(jié)果比較圖

綜上圖片說明，IFA+CII組病理變化特點和 CFA+CII組一樣明顯，但CFA+CII組病理變化更加嚴重和明顯。