FITC-Dextran，又稱異硫氰酸熒光素-葡聚糖、FITC-葡聚糖、FITC標(biāo)記葡聚糖、FITC-右旋糖酐、是一種異硫氰酸熒光素 (FITC)標(biāo)記的葡聚糖熒光探針，可用于評(píng)估體內(nèi)/體外大分子對(duì)半透膜的通透性、心血管、微循環(huán)、細(xì)胞單層空隙/運(yùn)動(dòng)、灌注、細(xì)胞膜滲透性、細(xì)胞內(nèi)吞、結(jié)腸炎等研究。

Dextran是一種親水性多糖，分子量從1 kDa到40,000 kDa、具有良好的水溶性、低毒、低免疫原性、惰性等特點(diǎn)；Dextran通過不常見的α-1,6糖苷鍵連接，可以避免大多數(shù)內(nèi)源性細(xì)胞糖苷酶的切割，因而Dextran conjugates（葡聚糖偶聯(lián)物）是一種較為理想的活細(xì)胞長期示蹤劑。

FITC-Dextran系列產(chǎn)品的標(biāo)記效率約為相當(dāng)于每個(gè)葡萄糖分子中有0.002-0.008個(gè)FITC分子標(biāo)記，即0.002-0.008 moles of FITC per mole of glucose unit，低水平的替換確保葡聚糖最小的結(jié)構(gòu)變化。

1.CAS號(hào)：60842-46-8；
2.分子量：~ 40000 KDa (Average)；
3.外觀：類黃色或橙黃色粉末；
4.溶解性：溶于水：25 mg/mL，透明至微渾濁，橙黃色；溶于鹽溶液；也可溶于DMSO、甲酰胺和其他極性有機(jī)溶劑，但不溶于低脂肪族醇、丙酮、氯仿和二甲基甲酰胺等。

圖1. FITC-Dextran結(jié)構(gòu)式示意圖

Dextran conjugates（葡聚糖偶聯(lián)物）包括FITC-Dextran，在很多領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用價(jià)值： 

1. 研究細(xì)胞膜相關(guān)：通道孔徑大小、細(xì)胞膜通透性等；

2. 植物細(xì)胞壁通透性、細(xì)胞壁孔隙率；

3. 毛細(xì)血管通透性、滲透性（血漿蛋白已被證明不與FITC葡聚糖結(jié)合）；

4. 細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的流體力學(xué)特性；

5. 動(dòng)物灌注實(shí)驗(yàn)，研究缺血再灌注損傷(Ischemia-reperfusion injury) ；

6. 血腦屏障完整性研究；

7. 腎臟、腸道功能性研究；

8. 神經(jīng)領(lǐng)域，研究樹突組織以及突觸相互作用的情況；

9. 研究細(xì)胞間結(jié)構(gòu)：細(xì)胞間隙連接(Gap junctions)、細(xì)胞質(zhì)橋(Cytoplasmic bridges)等；

10. 細(xì)胞內(nèi)吞作用、滲透作用、細(xì)胞連接通透性、細(xì)胞單層孔隙率、細(xì)胞層內(nèi)的頂端基底外側(cè)運(yùn)動(dòng)、（小分子，比如20KD，40KD等）；

11. 用于疾病如腫瘤等研究，藥物偶聯(lián)的右旋糖胺可以既降低細(xì)胞毒性，又增強(qiáng)藥效性，可研究控制藥物靶向情況；

12. FITC-葡聚糖對(duì)PH較為敏感，可用于研究環(huán)境酸化(Acidification)情況；

13. 作為示蹤劑等相關(guān)其他研究如微循環(huán)、血流、傷口愈合等過程。

產(chǎn)品使用說明

腸道細(xì)菌及毒素的移位可能是自身免疫性疾病發(fā)病的重要因素，手術(shù)、壓力、胃腸道疾病等會(huì)顯著增加粘膜通透性，也會(huì)增加細(xì)菌從腸粘膜進(jìn)到人體的機(jī)會(huì)，利用FITC-Dextran（比如：FITC-Dextran (MW 40000) FITC標(biāo)記葡聚糖(MW 40000)）可以很簡便快捷的評(píng)估細(xì)胞膜通透性，研究細(xì)胞膜功能以及胃腸道疾病。

【Dextran的分子量、電荷數(shù)、標(biāo)記情況、偶聯(lián)物等都可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響，使用濃度和作用時(shí)間請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)，并根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，?xì)胞種類，培養(yǎng)特性等）進(jìn)行摸索和優(yōu)化，以下使用濃度和操作步驟僅供參考?！?/span>

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)操作方案（僅供參考）

1.配置FITC-Dextran溶液：0.05 M磷酸鹽溶液(PBS)溶解化合物，充分震蕩溶解，配置成25 mg/mL濃度；

2.飼喂前和實(shí)驗(yàn)過程中，禁食小鼠4小時(shí)；

3.口服配置好的FITC-Dextran溶液 (20 mL/kg)；

4.3小時(shí)后，收集血漿（具體時(shí)間因動(dòng)物而異）；

5.使用PBS按照1：2（或更大）比例稀釋血漿；

注意：1. 樣品中的蛋白質(zhì)可能干擾并降低熒光強(qiáng)度(FI)。因此，為了準(zhǔn)確測(cè)定FITC-Dextran的滲透性，血漿與PBS的比例必須在所有樣品中保持一致。2. 建議用系列稀釋的FITC-Dextran制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于定性研究。
6.取50 μL或100 uL稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品轉(zhuǎn)移到黑色96孔板上，并在熒光讀取器中讀取熒光值。Ex（激發(fā)）：490 nm，Em（發(fā)射）：520 nm。波長帶寬（激發(fā)和發(fā)射）：9 nm。

建議使用12.5 μg/mL ~ 0.2 μg/mL濃度范圍作為標(biāo)準(zhǔn)范圍，并進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。為了制備標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，建議使用與樣品相同比例的正常小鼠血漿與PBS的稀釋劑。例如，如果使用1:2稀釋液進(jìn)行樣品稀釋，在0.05 M PBS中制備33%濃度（300 μL血漿中加入600 μL PBS）的正常小鼠血漿作為稀釋劑。

1. 取10 μL 25 mg/mL的FITC-Dextran，加入990 μL的PBS。（FITC-Dextran終濃度：250 μg/mL）；
2. 取12.5 μL稀釋后的FITC-Dextran，加入237.5 μL用0.05 M PBS稀釋配置好的33%正常小鼠血漿。（FITC-Dextran終濃度：12.5 μg/mL）；
3. 取125 μL的步驟2的終濃度為12.5 μg/mL溶液與等體積（125 μL）的33%小鼠正常血漿混合。（FITC-Dextran終濃度：6.25 μg/mL）；
4. 繼續(xù)按照上述步驟，稀釋配置FITC-Dextran終濃度為3.13 μg/mL、1.56 μg/mL、0.78 μg/mL、0.39 μg/mL和0.20 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液；
5. 取50 μL或100 μL稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品轉(zhuǎn)移到黑色96孔板上，并在熒光讀取器上讀??；
6. 從標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的FI值中減去FI空白值（空白值：0.05 M PBS配置的33%正常小鼠血漿）；
7. 將標(biāo)準(zhǔn)品的FI值（縱坐標(biāo)）相對(duì)于FITC-Dextran標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78, 0.39, 0.20 μg/mL）數(shù)值（橫坐標(biāo)）進(jìn)行繪圖。使用對(duì)數(shù)/對(duì)數(shù)圖來分析處理數(shù)據(jù)，可以使數(shù)據(jù)線性化。

3種熒光標(biāo)記葡聚糖的區(qū)別

3種（FITC-Dextran、Antonia Red-Dextran、TRITC-Dextran）熒光標(biāo)記葡聚糖的區(qū)別

注意事項(xiàng)

1.FITC-Dextran溶液高溫高壓滅菌可能引起熒光素的釋放，建議使用過濾方式除菌；
2.熒光物質(zhì)易發(fā)生淬滅，請(qǐng)注意避光使用和保存；
3.粉末配制溶液時(shí)，如有需要，可以渦旋振蕩、超聲或加熱（40-60ºC）助溶。若有不溶物，可短暫離心處理；
4.配制成儲(chǔ)存液后，可以0.22 μm濾膜過濾除菌，或酌情添加疊氮化鈉(Sodium azide)（終濃度2 mM）抑制微生物生長（不是必需）；
5.Dextran的分子量、電荷數(shù)、標(biāo)記情況、偶聯(lián)物等都可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響，使用濃度和作用時(shí)間請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)，并根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?xì)胞種類，培養(yǎng)特性等）進(jìn)行摸索和優(yōu)化；
6.產(chǎn)品建議分裝保存，避免反復(fù)凍融。

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