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      首頁 / 基因編輯 / 產(chǎn)品應(yīng)用詳情
       
      新品│CRISPR-Cas12b，賦能超靈敏、快速便攜式分子診斷
       
      CRISPR/Cas系統(tǒng)是細菌和古細菌中進化出來用于抵御噬菌體及外源DNA入侵的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，該技術(shù)自發(fā)現(xiàn)以來在基因編輯領(lǐng)域大顯身手，已成功運用于微生物、哺乳動物、植物的基因編輯中。隨著近年來診療體系從傳統(tǒng)的以醫(yī)院為中心變?yōu)槿ブ行幕?，檢測場景從醫(yī)院檢測變成社區(qū)或家用檢測，因此開發(fā)規(guī)?；⒆詣踊?、快速化的檢測技術(shù)成為趨勢?？茖W界發(fā)現(xiàn)CRISPR/Cas系統(tǒng)除在基因編輯領(lǐng)域的應(yīng)用以外，該技術(shù)在POCT檢測工具開發(fā)方面同樣具有獨特的優(yōu)勢，將現(xiàn)有技術(shù)結(jié)合CRISPR/Cas系統(tǒng)，有望開發(fā)速度更快、靈敏度更高、成本更低、檢測特異性更好、操作更便利的POCT檢測工具。
      


      

      

       
      

      


      

      

      


      

      圖1 CRISPR/Cas系統(tǒng)在分子診斷領(lǐng)域應(yīng)用示例[1]
      


      (點擊可查看大圖)
      


       
      

      


      

      CRISPR/Cas系統(tǒng)根據(jù)Cas蛋白的組成不同和效應(yīng)復合物的性質(zhì)，可分類Class 1和Class 2兩大類。其中Class 1系統(tǒng)的效應(yīng)復合物由4-7個Cas蛋白亞基組成，該類別的共同特征是利用多個Cas蛋白效應(yīng)復合物執(zhí)行切割功能；Class2系統(tǒng)的效應(yīng)復合物則是由單個多結(jié)構(gòu)域蛋白行使功能，如Cas9、Cas12、Cas13等。
      



      
AapCas12b Nuclease是來源于嗜酸耐熱菌(Alicyclobacillus acidophilus)的一種依賴tracrRNA：crRNA(或sgRNA)介導的DNA核酸內(nèi)切酶，在sgRNA的引導下特異性識別靶標單鏈DNA (ssDNA)或帶PAM (TTN)序列靶標雙鏈DNA (dsDNA)，并對靶序列進行特異性切割，使dsDNA斷裂并生成粘性末端。當AapCas12b Nuclease、sgRNA和靶標DNA結(jié)合形成三元復合物后，同時激活其對體系中非特異ssDNA的反式剪切活性，可將體系中的任意ssDNA序列切碎。
      

      


      

       
      


      


      圖2.Cas12b作用原理[2]
      

      


      

       
      


      翌圣AapCas12b Nuclease (10 μM) (Cat#14808ES)由ZymeEditor™酶改造平臺重組表達而來。AapCas12b Nuclease在37°C～65°C溫度范圍內(nèi)具有切割活性，可搭配多種恒溫擴增體系進行檢測方法開發(fā)，具有廣闊的應(yīng)用前景。
      

      


      

       
      


      

      

      

      01
      


      

      產(chǎn)品特點
      

      

      

      

      


      

      

      

      

       
      


       
      


       
      


       
      


       
      


       
      


       
      


       
      


       
      


       
      


       
      

      


      

      

      

      

      

      反應(yīng)溫度范圍廣：在37°C～65°C溫度范圍內(nèi)具有切割活性；
      



      
核酸酶殘留低：無核酸外切酶、切口酶、RNase A殘留；
      


       
      

      

      

      


       
      


      

      

      

      順式切割活性：在crRNA和tracrRNA（根據(jù)靶標序列進行設(shè)計）介導下可識別并特異性切割靶標ssDNA或帶PAM序列的靶標dsDNA，切割效果媲美進口品牌T*；
      



      
反式切割活性：AapCas12b Nuclease、sgRNA和靶標DNA結(jié)合形成三元復合物后，激發(fā)其反式切割活性，可將體系中的任意ssDNA序列切碎。
      

      

      

      

      

      

      

      

      


       
      

      


      

      

      

      

      02
      


      

      部分性能數(shù)據(jù)展示
      

      

      

      

      


      

      

      

      

      01
      

      


      

      順式切割活性：效果媲美進口品牌T*
      


      

       
      


      

       
      

      

      

      

      

      

      


      在20 μL的反應(yīng)體系，含有帶PAM序列的雙鏈Target DNA、sgRNA、Cas12b和1×reaction buffer，在60°C下反應(yīng)30 min，85°C下滅活5 min，在瓊脂糖凝膠電泳測定結(jié)果顯示，三批次AapCas12b Nuclease (10 μM) 均能有效切割雙鏈Target DNA，切割效果與進口品牌T*一致。
      


       
      

      


      

      

      


      

      圖3.AapCas12b Nuclease (10 μM)順式切割活性驗證
      

      


      

       
      


      

      

      

      

      02
      

      


      

      反式切割活性：能有效切割體系中的ssDNA
      


      

       
      


      

       
      

      

      

      

      

      

      


      在20 μL的反應(yīng)體系，含有帶PAM序列的雙鏈Target DNA、sgRNA、Cas12b、Report ssDNA熒光探針和1×reaction buffer，在60℃反應(yīng)1h，每30 sec采集一次熒光信號，結(jié)果顯示在Target DNA、sgRNA、Cas12b共同存在的情況下，Report ssDNA熒光探針能被切割，從而釋放熒光信號。
      

      


      

       
      


      


      圖4.AapCas12b Nuclease (10 μM)反式切割活性驗證
      

      


      

       
      

      


      

      

      

      03
      


      

      產(chǎn)品推薦
      

      

      

      

      


      

      


      參考文獻:
      
[1]孫雯君,黃行許,王鑫杰.基于CRISPR的快速靈敏便捷分子檢測[J].生物工程學報, 2023, 39(1):14.
      
[2] Li L, Li S, Wang J. CRISPR-Cas12b-assisted nucleic acid detection platform[J].Cold Spring Harbor Laboratory, 2018(10).DOI:10.1101/362889.
      

      

      

       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883