微球菌核酸酶簡(jiǎn)介

微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase)，也被稱(chēng)為Micrococcal Endonuclease或S7 Nuclease，是一種來(lái)源于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的DNA 和 RNA 核酸內(nèi)切酶。MNase酶在pH7-10和Ca²⁺的條件下可降解單鏈、雙鏈、線(xiàn)狀、環(huán)狀等多種形式的DNA或RNA的5'磷酸鍵，并產(chǎn)生3'磷酸末端的單核苷酸和寡核苷酸，常用于染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中的染色質(zhì)片段化！

圖1. Micrococcal Nuclease作用原理^[1]

 

在染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中，MNase酶能夠特異性消化核小體間連接區(qū)域的裸露DNA，而核小體核心顆粒中的DNA因受組蛋白的保護(hù)，可抵抗酶解作用，從而能完整保留與目標(biāo)蛋白結(jié)合的DNA片段。相較于傳統(tǒng)的超聲波片段化方法（隨機(jī)打斷染色質(zhì)，易損傷蛋白-DNA復(fù)合物），MNase酶切法具有高特異性與溫和的酶切特性，能顯著提升目標(biāo)DNA的富集效率與實(shí)驗(yàn)分辨率（圖2）。

圖2. MNase酶切割效果^[2]

目前應(yīng)用廣泛的適用于極低細(xì)胞投入量的ChIP-seq新技術(shù)—Ultra- Low-Input micrococcal nuclease-based Native ChIP(ULI-NchIP)^[3]，便是利用MNase酶解替代傳統(tǒng)的超聲法進(jìn)行染色質(zhì)的片段化。ULI-NchIP適用于微量實(shí)驗(yàn)材料, 可以從10³ 個(gè)細(xì)胞起始構(gòu)建高質(zhì)量測(cè)序文庫(kù), 適用于組蛋白修飾情況研究。

圖3. ULI-NchIP-seq實(shí)驗(yàn)流程圖^[4]

基于MNase酶在染色質(zhì)片段化方面的卓越性能，翌圣生物特別開(kāi)發(fā)了Micrococcal Nuclease （Cat#14547ES）。翌圣Micrococcal Nuclease無(wú)蛋白酶，宿主殘留低至<1 copy / 2000 U，DNA底物切除能力（酶活）與進(jìn)口品牌A*一致，輕松助力染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中的染色質(zhì)片段化！

 

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產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	規(guī)格	目錄價(jià)	活動(dòng)價(jià)
Micrococcal Nuclease(2,000 U/µL)	14547ES	320 KU	669元	0元

活動(dòng)細(xì)則：

1. 活動(dòng)時(shí)間：即日起-2025年4月30日；

2、活動(dòng)名額有限，每位客戶(hù)限一套。

 

 

翌圣Micrococcal Nuclease (Cat#14547ES)性能展示

1、DNA底物切除能力與進(jìn)口品牌A*一致

分別使用翌圣的Micrococcal Nuclease與進(jìn)口品牌A*的同類(lèi)產(chǎn)品切除1ug λ DNA底物，50 uL體系，37℃反應(yīng)15min。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明，翌圣Micrococcal Nuclease與進(jìn)口品牌A*的切除效果一致。

圖4. DNA底物切除能力

2、無(wú)蛋白酶殘留檢測(cè)

將不同批次的10000 U Micrococcal Nuclease分別與相應(yīng)的底物蛋白在37℃孵育16 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明，翌圣Micrococcal Nuclease無(wú)蛋白酶殘留。

圖5. 蛋白酶檢測(cè)

 

3、E. coli基因組DNA殘留< 1 copy/2000 U

對(duì)不同批次的Micrococcal Nuclease進(jìn)行E. coli gDNA殘留檢測(cè)，結(jié)果顯示翌圣Micrococcal Nuclease宿主基因組DNA殘留低于1 copy/2000 U。

圖6. E. coli g DNA殘留檢測(cè)

 

參考文獻(xiàn)

[1] Alexander M, Heppel LA, Hurwitz J. The purification and properties of micrococcal nuclease. Journal of Biological Chemistry. 1961;236:3014-3019

[2] Furey,Terrence S . ChIP-seq and beyond: new and improved methodologies to detect and characterize protein-DNA interactions.[J]. Nature Reviews Genetics, 2012, 13(12):840-52.

[3] Brind'Amour J, Liu S, Hudson M, Chen C, Karimi MM, Lorincz MC. An ultra-low-input native ChIP-seq protocol for genome-wide profiling of rare cell populations. Nat Commun. 2015 Jan 21;6:6033. doi: 10.1038/ncomms7033. PMID: 25607992.

[4] 王泓力,焦雨鈴.染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)方法[J].植物學(xué)報(bào), 2020, 55(4):6.DOI:10.11983/CBB20076.