日常實(shí)驗(yàn)中，在貼壁細(xì)胞傳代前需要把細(xì)胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來，細(xì)胞得以分離成單個(gè)懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi)。細(xì)胞消化的好，后續(xù)實(shí)驗(yàn)就會進(jìn)行的更加順利；反之，則既浪費(fèi)了時(shí)間又出不了成果。在細(xì)胞消化的方法中，酶消化法是最常用的方法，使用合適的消化酶則是細(xì)胞消化的關(guān)鍵步驟，今天小翌就來給大家整理一篇細(xì)胞消化類產(chǎn)品選擇指南，方便您更好的選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)品。
胰蛋白酶
重組胰蛋白酶
重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶。現(xiàn)代生物制藥的生產(chǎn)過程中，使用含有動(dòng)物源的原料，可能會將引起人畜共患病的潛在病毒源帶入產(chǎn)品中，如瘋牛病的BSE、口蹄疫病毒等，為了減少污染源，通過基因工程技術(shù)合成胰蛋白酶，解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。重組胰蛋白酶多用重組大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達(dá)并經(jīng)過多步層析純化獲得，無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性，其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源，能特異性切割多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基。因其無動(dòng)物源污染性和純度高，在醫(yī)藥開發(fā)、生化研究、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。
膠原酶
膠原酶（Collagenase）是一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是唯一一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，不同酶在應(yīng)用上有所偏向：
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膠原酶Ⅰ，通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備；
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膠原酶II，用于心臟、骨、肌肉、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備；
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膠原酶III，常用于乳腺細(xì)胞的制備；
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膠原酶IV，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。
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膠原酶Ⅴ，適用于胰腺小島細(xì)胞和結(jié)締組織細(xì)胞的分離。
復(fù)合胰蛋白酶
除了以上的胰酶和膠原酶外，還有一些常用的復(fù)合型產(chǎn)品。比如Accutase是包含蛋白水解酶和膠原酶活性的一種細(xì)胞消化液，是胰酶-EDTA消化液的完美替換產(chǎn)品，用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細(xì)胞。Accutase適用于組織解離和細(xì)胞分離，因分離后的細(xì)胞能保持完好的表面抗原，且不含任何動(dòng)物動(dòng)物或者細(xì)菌來源組分，可滿足對后續(xù)如細(xì)胞表面標(biāo)記、病毒生長分析、流式細(xì)胞分析以及生物反應(yīng)器相關(guān)檢測等多種實(shí)驗(yàn)的要求。
胰酶替代物
除了動(dòng)物胰臟來源的胰酶外，目前有些功能類似的胰酶替代物，如TrypLE™產(chǎn)品，因其純度高，細(xì)胞傷害小，消化作用溫和，且能穩(wěn)定保存在室溫條件，逐漸也成為不同細(xì)胞系培養(yǎng)的理想消化酶，產(chǎn)品優(yōu)勢也較為明顯。這類的產(chǎn)品使用過程無需使用胰蛋白酶抑制劑來滅活，同時(shí)也不含有動(dòng)物源，對于一些無血清生長的貼壁細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更為友好。
其他消化酶
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快速有效且溫和的細(xì)胞消化酶，對細(xì)胞損傷小，且能維持細(xì)胞膜完整性；
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來源于細(xì)菌，無支原體或其他動(dòng)物病毒污染；
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穩(wěn)定性強(qiáng)，不受溫度、pH及血清組分的影響；
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可用于多種類型組織和細(xì)胞的分離等。
| 產(chǎn)品 | 胰蛋白酶 | 重組胰蛋白酶 | 膠原酶 | Accutase | 胰酶替代物 | Dispase Ⅱ |
| 翌圣貨號 | 40123ES（無酚紅，含EDTA） 40124ES（無酚紅，無EDTA） 40126ES（含酚紅，無EDTA） 40127ES（含酚紅，含EDTA） |
40512ES 20416ES（質(zhì)譜級） |
40507ES 40508ES 40509ES 40510ES 40511ES |
40506ES | 40134ES（含酚紅） 40135ES（無酚紅） |
40104ES |
| 來源 | 脊椎動(dòng)物胰臟（豬） | 大腸桿菌（40512ES）/ 畢赤酵母（20416ES） |
Clostridium histolyticum | 非脊椎動(dòng)物 | 無動(dòng)物來源 | Bacillus polymyxa |
| 消化細(xì)胞類型 | 大部分連續(xù)的強(qiáng)貼壁細(xì)胞系 | 大部分連續(xù)的強(qiáng)貼壁細(xì)胞系 | 富含膠原蛋白的加厚培養(yǎng)基、多層細(xì)胞 | 原代細(xì)胞系、干細(xì)胞系和組織 | 需要確保細(xì)胞表面蛋白完整性的原代細(xì)胞等 | 強(qiáng)貼壁細(xì)胞系、上皮和一些腫瘤細(xì)胞株 |
| 溶解液 | 含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液 | 含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液（40512ES）； 1 mM HCL（20416ES） |
含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液 | DPBS溶液 | DPBS溶液 | Hepe緩沖鹽溶液 |
| 細(xì)胞存活 | 正常 | 正常 | 正常 | 較好 | 好 | 較好 |
| 是否需要凍融 | 是 | 是 | 是 | 是 | 否 | 否 |
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| PerfCel™l Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），無酚紅 | 40123ES60 | 100 mL |
| PerfCell™ Trypsin-no EDTA (0.25%), no phenol red 胰酶-無EDTA溶液（0.25%），無酚紅 | 40124ES60 | 100 mL |
| PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red 胰酶溶液（0.25%），含酚紅 | 40126ES60 | 100 mL |
| PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚紅 | 40127ES60 | 100 mL |
| Trypsin 1:250(powder) 胰蛋白酶1:250(粉末) | 40101ES25 | 25 g |
| PerfCell™ Recombinant Trypsin（powder）重組胰蛋白酶（粉末） | 40512ES10/60 | 10 mg/100 mg |
| Recombinant Trypsin（MS-SAFE）重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級） |
20416ES60 |
100ug |
| PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，含酚紅 | 40134ES60 | 100 mL |
| PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，無酚紅 | 40135ES60 | 100 mL |
| ACCUTASE細(xì)胞消化液 | 40506ES60 | 100 mL |
| Dispase II 分散酶II | 40104ES60/80 | 100 mg/1 g |
