Gus基因（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）是從大腸桿菌中分離出來(lái)的，其編碼的β-葡萄糖苷酸酶是一種水解酶，能催化許多β-葡萄糖苷酯類物質(zhì)的水解。絕大多數(shù)植物細(xì)胞內(nèi)是不存在內(nèi)源的GUS活性，因此Gus基因廣泛用作轉(zhuǎn)基因植物的報(bào)告基因，尤其廣泛應(yīng)用于研究外源基因瞬時(shí)表達(dá)的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。此外，Gus基因3’端與其他結(jié)構(gòu)形式的融合基因也能夠正常表達(dá)，所產(chǎn)生的融合蛋白仍具有GUS活性，這對(duì)研究外源基因表達(dá)的具體細(xì)胞部位提供了方便條件，也是它相對(duì)于其他報(bào)告基因的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)。
圖1 X-Gluc分子結(jié)構(gòu)式(CAS NO.114162-64-0)
X-Gluc(5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-glucuronide)可作為GUS的顯色底物。在適宜條件下，GUS可催化底物X-Gluc分解，反應(yīng)分為兩步：首先是切割葡糖醛酸部分產(chǎn)生無(wú)色吲哚氧基中間產(chǎn)物，隨后吲哚氧基中間產(chǎn)物被氧化成藍(lán)色不溶5,5’-二溴-4,4’-二氯，借此用來(lái)觀察轉(zhuǎn)基因植物中外源基因的表達(dá)情況，鑒定轉(zhuǎn)基因植株。
翌圣生物推出產(chǎn)品10904ES X-Gluc，純度>99%
GUS活性檢測(cè)（組織化學(xué)染色）
1、配制X-Gluc儲(chǔ)存液(20 mg/mL)
用1.5 mL DMF溶解30 mg X-Gluc粉末，終濃度為20 mg/mL。渦旋混勻，用鋁箔包好，分裝，于-20℃儲(chǔ)存，一年內(nèi)有效（注：若失效后，溶液則會(huì)變成亮紅色）。
2、取材
將葉片、花瓣、根莖等組織剪成小片，放于1.5 mL離心管中于4%多聚甲醛（新鮮配置）固定30 min，然后用磷酸鹽溶液或檸檬酸鹽溶液潤(rùn)洗。
注：用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如，擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預(yù)處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片(1-3mm)。當(dāng)操作大的組織和樣品時(shí)，可以選用真空滲入法來(lái)幫助底物滲入細(xì)胞。
3、染色
加入稀釋后配制好的GUS染色工作液(1 mg/mL)至完全覆蓋材料，25-37°C孵育1h至過(guò)夜，有明顯藍(lán)色出現(xiàn)。注意要做陰性和陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。
4、洗脫
將材料轉(zhuǎn)入70%乙醇或80%丙酮中脫色2-3次，至陰性對(duì)照材料為白色。GUS染色陽(yáng)性的藍(lán)色斑點(diǎn)很穩(wěn)定，在酒精中不褪色。
5、觀察
一般染色后，GUS染色陽(yáng)性的藍(lán)色斑點(diǎn)肉眼就能看到。但是有些材料可能藍(lán)色斑點(diǎn)很細(xì)微，要在顯微鏡下才能看到。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
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10904ES |
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10905ES |
