分子克隆作為分子生物學的一項成熟技術，幾乎每個實驗室都或多或少的會涉及。在分子克隆實驗中，限制性內切酶是克隆必備產品，但大家也常常因為限制性內切酶的各種問題而感到煩擾。比如小翌常被問到的：
1
限制性內切酶種類這么多，不知道如何選擇。
2
酶切不完全或出現亂切、錯切的情況。
3
酶切速度慢，需要 1 h 甚至過夜酶切。
4
多酶切還需要選擇多款酶切緩沖液。
針對第 1 個問題，小翌會簡單介紹一下什么是限制性內切酶，不同內切酶的分類如何，讓您對限制性內切酶有一個更全面的認識。
針對第 2~4 個問題，翌圣 FuniCut? 系列快速內切酶通過菌株改造，配合優(yōu)化的工藝，可以輕松解決以上難題！
限制性內切酶是一種能夠識別雙鏈 DNA 分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割 DNA 鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡稱限制酶。
不同的限制性內切酶會識別不同的 DNA 序列，它可以在識別序列內或距識別序列不遠的位置處切割DNA，酶切之后會形成不同類型的產物，如下圖 1 中的 BamHI 形成 5’粘性末端產物，KpnI 形成 3’粘性末端產物，EcoRV 形成平末端產物。
圖1.BamHI、KpnI、EcoRV 酶切示意圖
限制性內切酶除了最常用于分子克隆實驗中外，它還可以應用于疫苗研發(fā)生產、基因測序、SNP 鑒定、ddPCR 等領域。
限制性內切酶的命名主要是根據細菌的屬名、種名、菌株或血清型、發(fā)現的順序而定，以 BstEII 為例，命名規(guī)則如下表一所示：
表1.限制性內切酶的命名規(guī)則
根據結構的復雜程度、作用方式與輔因子的區(qū)別，限制性內切酶可分為四大類，下表二總結了各類的特點和典型酶種。
表2.不同限制性內切酶的區(qū)別
除了以上分類，根據識別和切割位點的異同可以分為3類，如下表三所示：
表3.同裂酶、異裂酶和同尾酶對比
產品特點：
1.快速酶切：5-15 min完成酶切，較常規(guī)酶切實驗可減少1-2 h以上。
2.通用緩沖液：任意內切酶組合都能用同一緩沖液，多酶切反應更簡便。
3.酶切效果：媲美進口品牌N*，且兼容其緩沖液。
4.直接電泳：提供紅色Color緩沖液，酶切產物可直接點膠電泳，操作更簡便。
5.精準酶切：即使過夜酶切，星號活性也極低。
性能展示：
1.在FuniCut? Buffer中，5 min完成單、雙和三酶切
M: 1 kb DNA Ladder
1:FuniCut? EcoRI
2:FuniCut? EcoRI+KpnI
3:FuniCut? EcoRI+KpnI+SmaI
C:未酶切質粒對照（含多個酶切位點）
2.酶切效果媲美N*、T*進口品牌，并且與其buffer兼容性好
M:1 kb DNA Ladder
1:Yeasen BamHI+ Yeasen Buffer
2:Yeasen BamHI+ T* Buffer
3:T* BamHI+T* Buffer
4:Yeasen BamHI+ N* Buffer
5:N* BamHI+N* Buffer
D:未酶切質粒對照（含2個BamHI位點）
3.過夜酶切，星號活性極低
圖4.分別使用翌圣、T*公司、N*品牌的HindIII、NheI、PstI、XbaI、XhoI快速內切酶，以λDNA為底物，按照各品牌推薦的實驗體系，進行過夜酶切（16 h），酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳。
4.高度冗余，輕松應對一定程度的過量底物
圖5.以 FuniCut? EcoR I、Eag I、XbaI、Sac I快速限制性內切酶，分別以1 μg、1.5 μg質粒為底物，酶切5 min，酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳。
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