選對關(guān)鍵酶原料，讓LAMP/RT-LAMP更靈敏、更快捷！
等溫擴(kuò)增技術(shù)可在恒溫條件下實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增特異性核酸序列的目的，因無需專用的儀器設(shè)備、擴(kuò)增時間短、靈敏度高等特點(diǎn)，在現(xiàn)場檢測和即時診斷中顯示了良好的應(yīng)用前景，非常適于分子診斷工具的開發(fā)。
根據(jù)不同的擴(kuò)增原理，等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)可分為很多類，主要包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)、交叉引物擴(kuò)增 (CPA)、鏈替代擴(kuò)增 (SDA)、重組酶聚合酶擴(kuò)增 (RPA)、依賴核酸序列的擴(kuò)增 (NASBA)、滾環(huán)擴(kuò)增 (RCA)和依賴解旋酶的擴(kuò)增 (HAD)等。目前最常見、應(yīng)用最廣的當(dāng)屬日本學(xué)者Notomi等在2000年開發(fā)的環(huán)介導(dǎo)核酸等溫擴(kuò)增技術(shù)LAMP，其技術(shù)特征是針對靶基因上的6個區(qū)域設(shè)計4~6條引物，利用鏈置換型的Bst DNA聚合酶在60℃~65℃恒溫條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，在15-60 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)序列109-1010倍的擴(kuò)增。
針對LAMP/RT-LAMP技術(shù)，翌圣生物可提供高品質(zhì)等溫擴(kuò)增核心酶原料，包括鏈置換Bst DNA聚合酶、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、防污染UDG酶、RNase抑制劑，目前已獲得眾多客戶的好評，完美替換進(jìn)口品牌，為客戶解決了貨期和成本問題。
翌圣-鏈置換Bst DNA聚合酶
翌圣生物Bst Plus DNA Polymerase（Cat#14402ES）是將缺少5′→3′外切核酸酶結(jié)構(gòu)域的Thermophilic Geobacillus sp DNA 聚合酶基因在E.coli 中表達(dá)純化而得。該酶鏈置換能力強(qiáng)，具備高靈敏度、高擴(kuò)增效率、高dUTP耐受性的優(yōu)勢，可廣泛應(yīng)用于基于等溫擴(kuò)增技術(shù)的病原體即時檢測。
靈敏度低至50 copies/T，反應(yīng)時間＜15 min（熒光定量RT-LAMP法）
圖1. 用翌圣Bst Plus DNA Polymerase進(jìn)行RT-LAMP反應(yīng)，擴(kuò)增新 冠病毒。25 μL反應(yīng)體系中，50 copies/T的檢出率達(dá)100%，反應(yīng)時間＜15 min。
高dUTP耐受性
使用翌圣Bst Plus DNA Polymerase進(jìn)行RT-LAMP反應(yīng)，擴(kuò)增新 冠病毒(20 copies/T)。在推薦反應(yīng)方案中引入dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng)，使用dUTP替換dTTP。對比全U（35 mM）替換（紅色擴(kuò)增曲線）與T：U = 1：1（藍(lán)色擴(kuò)增曲線）的擴(kuò)增結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在反應(yīng)體系中添加dUTP對Bst Plus DNA Polymerase的靈敏度及擴(kuò)增效率無影響，該酶具有較高的dUTP耐受性。
圖2. 翌圣Bst Plus DNA Polymerase高dUTP耐受性驗(yàn)證結(jié)果
翌圣-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶
翌圣生物Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶（Cat#11111ES、14601ES）cDNA合成速度快，熱穩(wěn)定性高，可耐受高達(dá)65℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時，該酶增強(qiáng)了與模板的親和力，非常適合少量模板及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。此外，本品可擴(kuò)增長達(dá)19.8 kb的cDNA。
反應(yīng)溫度55℃，耐受65℃高溫
圖3. 以300 ng 297T細(xì)胞總RNA為模板，使用Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase（Cat#11111ES）在42~65℃下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。取1μL cDNA為模板，使用2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預(yù)混液（Cat#10149ES）擴(kuò)增不同類型模板結(jié)果圖。
線性檢測范圍廣，Total RNA 10 pg-5 μg
圖4. 以10 pg~5 μg297T細(xì)胞總RNA為模板，使用Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase（Cat#11111ES）合成cDNA。取1μL cDNA為模板，使用Hieff UNICON® Power qPCR預(yù)混液（Cat#11195ES）擴(kuò)增PTTG1基因。
翌圣-防污染UDG酶
翌圣生物Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG) , 1 U/μL（Cat#14455ES）能催化水解含有尿嘧啶的DNA鏈的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶，無核酸酶、切口酶、RNase酶殘留，可輕松控制氣溶膠污染。本品適用于PCR、qPCR以及RT-qPCR等常見分子生物學(xué)體系。
消化能力強(qiáng)
0.025 U防污染UDG酶即可完全消化360 ng 200 bp的dU-DNA。
圖5. 0.05 U、0.025 U、0.0125 U、0.00625 U、0.003125 U防污染 UDG酶與360 ng 200 bp dU-DNA在25℃孵育30 min電泳結(jié)果圖。
兼容性強(qiáng)
完美兼容下游qPCR以及RT-qPCR反應(yīng)體系，在高投入量下對檢測體系無影響。
圖6. 不同濃度防污染UDG酶可兼容qPCR以及RT-qPCR反應(yīng)體系，對DNA及RNA模板擴(kuò)增無抑制。
翌圣-RNase抑制劑
翌圣生物Murine RNase Inhibitor（Cat#10603ES、10610ES、14671ES）是以可溶形式在大腸桿菌中表達(dá)純化的重組鼠源RNase抑制劑，能夠廣泛抑制各種類型RNase (RNase A, B, C)。經(jīng)RT-PCR、RT-qPCR檢驗(yàn)，本產(chǎn)品能與各種逆轉(zhuǎn)錄酶及DNA Polymerase兼容。
高效RNase抑制能力
圖7. 1μL Murine RNase inhibitor（40 U/µL, Cat#10603ES）可有效抑制5ng RNase，1μg HEK細(xì)胞總RNA電泳結(jié)果圖。
Murine RNase Inhibitor在qPCR實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)優(yōu)于國際同類產(chǎn)品
表8. 不同濃度梯度的 MRI 與 100 ng RNase A 共孵育以封閉 RNase A 的活性，再消化處理 1 μg RNA。用一步法 RT-qPCR 的方法檢測 RNA的降解情況，以此來判斷 MRI 對 RNase A 的封閉效果。PC 代表體系中僅RNA不加 RNase A 和 MRI。
產(chǎn)品選擇指南
|
產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
|
Bst酶 |
14402ES |
|
|
Bst酶凍干粉-Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (60 U/μL，Glycerol-Free) |
14405ES |
|
|
RT-LAMP預(yù)混液 |
13762ES |
|
|
pH顯色法可凍干-RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit（含凍干保護(hù)劑） |
13920ES |
|
|
13906ES |
||
|
逆轉(zhuǎn)錄酶 |
11111ES |
|
|
三代逆轉(zhuǎn)錄酶不含甘油Hifair® III Reverse Transcriptase,600U/μL,Glycerol-free |
11297ES |
|
|
防污染UDG酶 |
14455ES |
|
|
14001ES |
||
|
鼠源RNase抑制劑 |
10603ES |
|
|
10703ES |
