Hieff qPCR SYBR Green Master Mix是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增的預(yù)混合溶液。Mix中含有熱啟動(dòng)Hieff Taq DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+。預(yù)混ROX。使用時(shí)，僅需在擴(kuò)增體系中加入模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，大大簡(jiǎn)化操作過(guò)程，降低污染幾率。

 

操作方便 —— 預(yù)混ROX。

精準(zhǔn)性好，線性檢測(cè)范圍廣 —— 配體法熱啟動(dòng)酶隨溫度變化實(shí)時(shí)調(diào)節(jié)DNA聚合酶活性。

重復(fù)性高 —— 雙陽(yáng)離子緩沖液保證熱啟動(dòng)酶活穩(wěn)定。

擴(kuò)增性能優(yōu)良 —— 緩沖液中含有PCR增強(qiáng)劑。

特異性高 —— 添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子。

 

Hieff qPCR Mix 的優(yōu)勢(shì)所在！
 

1. 線性檢測(cè)范圍廣

 

圖1. 以質(zhì)粒DNA（106-101 拷貝/ul）為模板，10倍梯度稀釋，擴(kuò)增擬南芥Actin基因。

結(jié)果顯示Hieff qPCR SYBR Green Master Mix可在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系，擴(kuò)增效率高，擴(kuò)增高度特異，線性關(guān)系良好。
 

2. 精準(zhǔn)性好
 

圖2. 以人293T細(xì)胞cDNA為模板，經(jīng)不同倍數(shù)的梯度（5倍或2倍）稀釋，擴(kuò)增Actin基因。

Hieff qPCR SYBR Green Master Mix可精確分辨5倍，甚至低至2倍的模板量差異。而且在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)表現(xiàn)良好。
 

3. 重復(fù)性高

圖3. 以人293T細(xì)胞cDNA為模板，使用Hieff qPCR SYBR Green Master Mix進(jìn)行90孔平行重復(fù)實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增人Actin基因，本產(chǎn)品表現(xiàn)出極好的擴(kuò)增重復(fù)性。

4. 擴(kuò)增性能優(yōu)良

圖4. 以10倍梯度稀釋的人293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增Actin基因，與同類(lèi)產(chǎn)品相比，Hieff qPCR SYBR Green Master Mix擴(kuò)增熒光信號(hào)更強(qiáng)，靈敏度更高，且復(fù)孔重復(fù)性更好。

5. 特異性高

圖5. 以人293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增6個(gè)不同基因。相較于其他品牌同類(lèi)產(chǎn)品，Hieff qPCR SYBR Green Master Mix擴(kuò)增目的片段單一，熔解曲線表現(xiàn)出更少的非特異擴(kuò)增峰及引物二聚體峰。

 

客戶體驗(yàn)專區(qū)之樣本數(shù)據(jù)

客戶單位：上海交通大學(xué)

產(chǎn)品名稱：Hieff qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus)（Cat. NO. 11202）

儀器型號(hào)：ABI 7500
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：材料：人293T細(xì)胞。反轉(zhuǎn)錄RNA起始量：2 μg。cDNA稀釋倍數(shù)：2倍。定量體系：20 μl。檢測(cè)基因：Actin、FN。

結(jié)果分析：較其他品牌同類(lèi)產(chǎn)品，翌圣特異性更好，Ct值整體低1-2，且重復(fù)性較好。

 

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客戶單位：清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院

產(chǎn)品名稱：Hieff qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox Plus)（Cat. NO. 11203）

儀器型號(hào)：ABI Step One Plus
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：材料：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。反轉(zhuǎn)錄RNA起始量：1 μg。cDNA稀釋倍數(shù)：20倍。定量體系：20 μl。檢測(cè)基因：STAT1。

結(jié)果分析：兩家產(chǎn)品熔解曲線均為單一峰，與其他品牌同類(lèi)產(chǎn)品相比，翌圣Ct值更小，擴(kuò)增效率較高。

 

優(yōu)越的品質(zhì)，超低的價(jià)格（5ml=200次定量實(shí)驗(yàn)=498元）

 

試劑選擇指南【參照儀器型號(hào)】

Cat. NO. 11201. Hieff qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) ：

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000; 

Roche Applied Science: LightCycler480, LightCycler2.0; Lightcycler96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

 

Cat. NO. 11202. Hieff qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) ：

Applied Biosystems: 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio Dx, QuantStudio 3and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P.

 

Cat. NO. 11203. Hieff qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox Plus) ：

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus.

 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )	11201ES08	5ml
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus)	11202ES08	5ml
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus)	11203ES08	5ml

 

FAQ

Q：溶解曲線出現(xiàn)雙峰，應(yīng)如何優(yōu)化實(shí)驗(yàn)？

A：熔解曲線出現(xiàn)雙峰，需要通過(guò)DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標(biāo)峰是引物二聚體還是非特異性擴(kuò)增。

如果是引物二聚體，建議降低引物濃度，或者重新設(shè)計(jì)擴(kuò)增效率高的引物。

如果是非特異性擴(kuò)增，請(qǐng)?zhí)岣咄嘶饻囟龋蛘咧匦略O(shè)計(jì)更高特異性的引物。

Q：定量結(jié)果中，Ct值多大比較合適？

A：Ct 值落在 20-30 之間時(shí)，定量分析最準(zhǔn)確；

Ct 值小于 10，需要將稀釋模板后，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；

Ct 值介于 30-35 之間，需要提高模板濃度，或者增大反應(yīng)體系的體積，以提高擴(kuò)增效率，保證結(jié)果分析的準(zhǔn)確性；

Ct 值大于 35 時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無(wú)法定量分析基因的表達(dá)量，但可用于定性分析。

Q：如何提高實(shí)驗(yàn)重復(fù)性？

A：使用性能較好的移液槍；

qPCR mix使用前充分混勻；

定期校準(zhǔn)儀器：定量PCR儀不同位置溫度控制不一致；

模板濃度太低：模板濃度越稀，重復(fù)性越差，減少模板稀釋度或提高加樣體積；

大反應(yīng)體系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：將模板做高倍稀釋，以大體積加入反應(yīng)體系中；

將引物和qPCR Mix混合配成大體系，混勻：總體積對(duì)應(yīng)的加樣孔數(shù)要比計(jì)劃的加樣孔數(shù)多1-2個(gè)。

 

已發(fā)表文獻(xiàn)（部分）

【1】Han X, Wang R. Mapping the Mouse Cell Atlas by Microwell-Seq. Cell. 2018 Feb 22;172(5):1091-1107.e17. doi: 10.1016/j.cell.2018.02.001.  （浙江大學(xué)）（影響因子：30.410）

【2】Wang Y, Hu SB. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158. doi: 10.1038/s41556-018-0204-2. Epub 2018 Sep 24. （中科院細(xì)胞生化所）（影響因子：20.460）

【3】Wang J, Ge P. The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation. Nat Commun. 2017 Aug 15;8(1):244. doi: 10.1038/s41467-017-00279-z.（中科院微生物所）（影響因子：12.353）

【4】Yafen Wang, Xiong Zhang. Bisulfite-free, single base-resolution analysis of 5-hydroxymethylcytosine in genomic DNA by chemical-mediated mismatch. Chem. Sci., 2019,10, 447-452 （武漢大學(xué)）（影響因子：8.757）

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Hifair II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus)	11123ES60	100T

HB190129