DNA Marker是分子量不同的DNA片段的組合,主要用途為DNA分子凝膠電泳時(shí),與樣品共同加入凝膠中進(jìn)行電泳分離,通過樣品條帶與DNA Marker對應(yīng)條帶大小及亮度的對比,可以粗略估算樣品DNA分子量的大小以及在溶液中的濃度。翌圣生物DNA Marker分子量大小范圍覆蓋了從100 bp到15 kb的DNA片段,符合絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)需求。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、穩(wěn)定性強(qiáng),可在室溫保存3-6個(gè)月;
2、背景干凈、帶型穩(wěn)定、大小精準(zhǔn);
3、含指示帶,各條帶濃度已知,便于定位及半定量分析;
4、含上樣緩沖液,可直接電泳,方便快捷;
5、附有5×loading buffer,可供樣品加樣使用。
電泳圖示
注意事項(xiàng)
1、保存方法:室溫穩(wěn)定保存3~6個(gè)月,更長時(shí)間請于4℃或-20℃保存。
2、DNA Marker適用于瓊脂糖凝膠電泳中DNA條帶的分析,不建議用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。
3、凝膠濃度及緩沖液的選擇:
瓊脂糖濃度 |
有效分離范圍(bp) |
推薦緩沖液 |
0.5% |
2000-50000 |
1×TAE |
0.8% |
800-10000 |
1×TAE |
1.0% |
400-8000 |
1×TAE |
1.2% |
300-7000 |
1×TAE |
1.5% |
200-3000 |
1×TAE/0.5×TBE |
2.0% |
100-2000 |
1×TAE/0.5×TBE |
3.0% |
25-1000 |
0.5×TBE |
【注】:大片段選擇低濃度凝膠,用TAE緩沖液體系電泳;小片段選擇高濃度凝膠,用TBE緩沖體系電泳。
4、核酸染料的選擇:
EB(溴化乙錠)是一種高靈敏的熒光染色劑,最大激發(fā)波長為302 nm,可用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的核酸。EB與核酸中的堿基嵌合式結(jié)合,具有一定的毒性。
YeaRed(Cat#10202ES76)和YeaGreen(Cat#10204ES76)是一種新型無毒核酸染料,具有獨(dú)特的油性分子結(jié)構(gòu),不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),不易揮發(fā)升華,人體不會(huì)吸入,從而保證了實(shí)驗(yàn)者安全。艾姆斯氏測試結(jié)果也表明YeaRed、YeaGreen在凝膠染色濃度下完全沒有誘變性,因此相對于EB的強(qiáng)致癌性是一種安全無毒的核酸染料。另外,YeaRed與EB具有相同的光譜特性,故無需改變現(xiàn)有的成像系統(tǒng)即可完美取代EB。
FAQ
為什么DNA Marker大分子條帶拖帶分不開?
核酸染料與DNA Marker結(jié)合不充分。因?yàn)榇蠓肿訔l帶需要結(jié)合的核酸染料更多,若核酸染料不飽和,大分子條帶更易受到遷移的影響,導(dǎo)致拖帶分不開。建議減少DNA Marker的使用量(可用水稀釋5倍后取8-10 μL進(jìn)行上樣)或提高核酸染料的濃度。
為什么DNA無條帶或條帶弱?
1)DNA上樣量不夠,需加大上樣量;
2)DNA條帶已跑出凝膠;
3)DNA條帶被示蹤染料遮蓋;
4)凝膠中未加核酸染料;
5)瓊脂糖凝膠放置太久,建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
為什么DNA Marker條帶彌散?
1)DNA有部分降解,檢查放置條件是否溫度過高;
2)電泳時(shí)電壓過低,使DNA條帶發(fā)生擴(kuò)散,電壓建議110v-130v,45 min以上跑膠;
3)瓊脂糖凝膠濃度不合適,根據(jù)說明書建議的凝膠濃度配制;
4)瓊脂糖凝膠質(zhì)量較差,建議重新配制。
為什么樣品條帶與DNA Marker條帶相比,出現(xiàn)大小不一致現(xiàn)象?
建議將293無血清培養(yǎng)基保存在2 - 8℃冰箱中,避免光照和高溫。開封后應(yīng)盡快使用,避免長時(shí)間存放。
在使用無血清培養(yǎng)基過程中,如果出現(xiàn)細(xì)胞生長不良怎么辦?
1)DNA的遷移不僅與實(shí)際大小有關(guān),也與是否結(jié)合有蛋白、離子狀態(tài)、DNA結(jié)構(gòu)、凝膠等因素有關(guān)。核酸的電泳遷移率與DNA/染料的量的比例關(guān)系比較重要,當(dāng)核酸染料量不足時(shí),就會(huì)發(fā)生遷移率誤差較大的情況;
2)樣品中如果含有較高的鹽離子濃度,也會(huì)引起較大的遷移誤差;
3)樣品上樣量與DNA Marker條帶的量相差較大或體積相差較大時(shí),也會(huì)引起較大的遷移誤差。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
10501ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10502ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10504ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10505ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10507ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10510ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10511ES80 |
1 mL |
|
10512ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10515ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10516ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10517ES60/80 |
100 T/10×100 T |
|
10518ES60/80 |
100 T/10×100 T |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
10202ES76 |
500 μL |
|
10204ES76 |
500 μL |
|
10208ES60/76 |
100 g/500 g |
|
10213ES08 |
5×1 mL |
|
10212ES08 |
5×1 mL |