遇到支原體污染，如何挽救您無比珍貴的細(xì)胞？
——支原體檢測、預(yù)防、去除一步到位！
實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞工廠在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，一直受到支原體污染的困擾，翌圣生物（YEASEN）的細(xì)胞房曾經(jīng)也受到過支原體的污染，我們選擇過很多進(jìn)口品牌的清除劑對支原體進(jìn)行滅殺，這些品牌很難做到整體清除。針對這個(gè)問題，經(jīng)過我們多次的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，推出了整體清除支原體的方案。我們的產(chǎn)品有：支原體檢測、培養(yǎng)體系中支原體的清除、環(huán)境中支原體的清除（培養(yǎng)箱、水浴鍋、超凈臺(tái)和細(xì)胞房）、支原體預(yù)防相關(guān)。
背景介紹
支原體污染對細(xì)胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響，已經(jīng)成為在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的一個(gè)嚴(yán)重問題，保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率為15-35%，嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。因此，定期進(jìn)行支原體檢測和去除，確保無支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)才能獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
>>>什么是支原體（Mycoplasma）
支原體又稱霉形體，直徑在0.1-0.3μm，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的、最簡單的原核生物，可以輕松地通過濾膜，混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。通常依附在細(xì)胞膜表面，支原體沒有剛性的細(xì)胞壁，因此普通的抗生素對它根本不起作用，實(shí)驗(yàn)室常見的種類有：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。
圖1：支原體的形態(tài)及特點(diǎn)
>>>支原體污染的后果
細(xì)菌和真菌造成的污染相對比較容易檢測、預(yù)防和去除，然而支原體造成的污染很難察覺，即使生長密度高達(dá) 107-109 CFU/mL，也很難有污染跡象（渾濁、pH 變化等）。支原體污染后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長變慢，狀態(tài)變差，不會(huì)馬上使細(xì)胞致死，但會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù)，如改變細(xì)胞膜抗原性，改變細(xì)胞新陳代謝，干擾核酸的合成，改變 DNA 轉(zhuǎn)染效率，導(dǎo)致染色體畸變等。
圖2：受支原體污染后細(xì)胞出現(xiàn)的相關(guān)狀態(tài)的改變
>>>典型的支原體污染來源
① 細(xì)胞之間交叉染；
② 工作環(huán)境或?qū)嶒?yàn)器材的污染；
③ 實(shí)驗(yàn)者無菌操作不佳；
④ 培養(yǎng)基或其他試劑污染；
⑤ 制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染；
>>>細(xì)胞遇到支原體污染，怎么辦？
圖3：支原體污染整體解決方案
Yeasen三位一體幫您解決細(xì)胞支原體污染問題
>>>支原體檢測
1.一步法恒溫支原體檢測：
Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑采用獨(dú)有的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，在顏色判別方面具有更強(qiáng)的辨識(shí)度，由紫紅色（陰性）向天藍(lán)色（陽性）的變化，更利于肉眼的判別。
圖4：一步法支原體檢測操作流程
2.PCR法支原體檢測：
Yeasen PCR支原體檢測法不同于普通的一步法PCR檢測方法，將原先的1對引物提高至3對引物，針對支原體16s和23s保守區(qū)進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增，在改變產(chǎn)品非特異性的同時(shí)大大提升了產(chǎn)品的靈敏度，可以檢測低至單個(gè)拷貝的支原體。
圖5: PCR法擴(kuò)增含不同濃度支原體樣品獲得的凝膠電泳圖
表1：Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑所能檢測的支原體種類
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Mycoplasmsalivarium |
Mycoplasm hominis |
Mycoplasmhyorhinis |
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Mycoplasm fermentans |
Mycoplasmorale |
Mycoplasmbovis |
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Mycoplasmarthritidis |
Mycoplasmbovigenitalium |
Mycoplasmgypis |
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Mycoplasmcolumbinum |
Mycoplasminers |
Mycoplasmcloacale |
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Mycoplasmneophronis |
Mycoplasmgallinarum |
Mycoplasmindiense |
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Mycoplasmlepharyngis |
Mycoplasmlipophilum |
Mycoplasmfelis |
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Mycoplasmsphenisci |
Mycoplasmalvi |
Mycoplasmfaucium |
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Mycoplasm falconis |
Mycoplasmcolumbinum |
Mycoplasmcitelli |
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Mycoplasmarginini |
Mycoplasmcaviae |
Mycoplasmmaculosum |
【注】：藍(lán)色部分為一步法恒溫檢測和PCR法支原體檢測所能檢測的相同支原體
>>>MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×）
MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過抑制 DNA 和支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清除效果且對細(xì)胞無傷害，較大程度上挽救您的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來的損失。
圖6：細(xì)胞去除效果的展示
支原體去除試劑的特點(diǎn)：
毒性低：對細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞活力檢測和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等；
穩(wěn)定性強(qiáng)：-20℃試劑能較長時(shí)間保存并保持高效作用；
操作簡單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；
起效快：“立竿見影”、最快3天即可見效；
去除范圍廣：能去除實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)支原體類型。
圖7：支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測圖示
>>>支原體預(yù)防
FAQ
>>> Q:如何檢測新鮮的培養(yǎng)基是否有支原體污染？
A:把新鮮的培養(yǎng)基放在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)（樣品），吸取一定的上清進(jìn)行檢測。如果樣品的顏色變成天藍(lán)色或者出現(xiàn)PCR擴(kuò)增條帶，則證明含有支原體污染。
>>> Q:對于同一個(gè)樣品，為什么一步法恒溫試劑盒檢測結(jié)果為陽性，而PCR檢測為陰性呢？
A:一步法恒溫檢測試劑盒檢測的支原體的種類是27種，而PCR檢測方法檢測的是常見的12種支原體。樣品中污染的支原體可能不包括在PCR法檢測的支原體種類內(nèi)。
>>> Q:對于同一個(gè)樣品，為什么PCR結(jié)果為陽性，而一步法恒溫檢測試劑盒結(jié)果為陰性？
A:PCR方法的靈敏度要高于一步法恒溫檢測法，可以檢測單個(gè)拷貝的支原體，而一步法需要103個(gè)拷貝的支原體數(shù)目。
>>> Q:巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測試劑盒到底哪個(gè)比較好呢？
A:客戶可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)的產(chǎn)品，也可以聯(lián)合使用兩者對支原體進(jìn)行鑒定。
訂購信息
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產(chǎn)品 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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支原體檢測試劑盒 |
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40601ES10 |
10 assays |
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40601ES20 |
20 assays |
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MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 |
40612ES25 |
25 T |
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40612ES60 |
100 T |
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支原體去除試劑 |
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40605ES02 |
500 mL |
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40605ES03 |
2×500 mL |
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40605ES08 |
10×500 mL |
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40607ES01 |
100 uL |
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40607ES03 |
1 mL |
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40607ES08 |
5×1 mL |
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支原體預(yù)防試劑 |
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40608ES03 |
1 mL |
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40608ES08 |
5×1 mL |
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MycGuardAH™ -1 Solution (100×) 細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤1號(hào)消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防） |
40609ES60 |
100 mL |
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MycGuard™-2 Solution (500×) 水浴鍋2號(hào)消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防） |
40610ES60 |
100 mL |
