完整性一般通過瓊脂糖凝膠電泳判斷，5SrRNA、18SrRNA和28SrRNA分子量大小不同，遷移速率不同，電泳條帶上呈現(xiàn)5S、18S和28S三條條帶，且28S正好是18S寬度的兩倍，條帶清晰明亮，就說明RNA的完整性較好（圖1）。

圖1（完整性較好的RNA瓊脂糖）

而純度和濃度則通過紫外分光光度計測量，核酸所含嘌呤和嘧啶分子具有共軛雙鍵，在260nm波長處有最大吸收峰，而蛋白質(zhì)含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，在280nm波長處具有最大吸收峰，鹽離子在230nm波長處具有最高吸收峰，因此經(jīng)常使用260、280、230nm下的吸光度分別代表核酸、蛋白質(zhì)和碳水化合物、多肽、苯酚等有機(jī)物的值，通過260nm吸收值計算濃度，260nm/280nm吸收值的比值，用于評估蛋白質(zhì)污染比例。

一般認(rèn)為OD260/280比值在1.8-2.0或者1.8-2.1之間的RNA純度較好，但也會遇到不少OD260/280大于2.1的情況。我們先來看一張教科書式的RNA全光譜掃描圖（圖2）這里的OD260/280是2.15，但RNA仍然是完好沒有降解的，也就是說理想狀態(tài)下，100%純度的RNA，或者說基本不殘留蛋白的純RNA， OD260/280比值是可以大于2.1甚至到2.2的，也證明了OD260/280比值超過2.1就是降解這個概念是需要重新審視的，單憑OD260/280容易誤傷我們的勞動成果，是否真的降解，需要結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳，或者安捷倫模擬電泳圖來確定。

圖2（RNA全光譜掃描圖）

圖3（0.1mM 的胍殘留導(dǎo)致OD260/230比值降低）

 圖4（100mM的胍殘留未抑制下游反轉(zhuǎn)錄/熒光定量的CT值）

RNA提取既基礎(chǔ)又重要，通過以上介紹，相信大家已經(jīng)對RNA的質(zhì)控方法有了更全面的了解，在實(shí)踐中更需要嚴(yán)謹(jǐn)?shù)貋韺NA進(jìn)行質(zhì)控，唯有更好的把控RNA 質(zhì)量，我們才能識別真正因樣品質(zhì)量不好導(dǎo)致的后續(xù)實(shí)驗(yàn)失敗，從而可以節(jié)省寶貴的時間、精力和成本，祝大家都能順利完成實(shí)驗(yàn)。