隨著糖蛋白質(zhì)組學(xué)和抗體藥研究的迅速發(fā)展，糖基化修飾也備受關(guān)注。細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與病原體的接觸主要是通過(guò)糖與蛋白質(zhì)相互作用完成的，糖基化決定了糖復(fù)合物的粘附特性。在IgG中，F(xiàn)c區(qū)Asn297處的保守N-連接糖對(duì)其活性也至關(guān)重要。此外，一些抗體還具有額外的N-糖鏈，與 Fc區(qū) Asn297處的保守位點(diǎn)一起影響抗體的識(shí)別、半衰期和免疫反應(yīng)。

蛋白質(zhì)糖基化是一種復(fù)雜的翻譯后修飾，涉及糖鏈在蛋白質(zhì)特定位點(diǎn)的連接，依據(jù)糖鏈類型的差異，糖蛋白被分為N-連接糖蛋白、O-連接糖蛋白等；另外，蛋白質(zhì)糖基化還受到宿主細(xì)胞類型和發(fā)酵條件（如培養(yǎng)基、pH值、溫度等）波動(dòng)的影響。因此，糖蛋白在糖基化模式上通常具有異質(zhì)性，包括糖基化位點(diǎn)、糖基化程度以及糖鏈的具體結(jié)構(gòu)，使得糖鏈分析和結(jié)構(gòu)表征工作極具挑戰(zhàn)，為了最大程度上獲得糖鏈結(jié)構(gòu)信息，目前糖鏈分析的主要策略是先把糖鏈從蛋白上游離下來(lái)，然后進(jìn)行詳細(xì)的分析表征。在此策略中，高效、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的去糖基化方法至關(guān)重要。

酶促法是目前應(yīng)用比較廣泛的去糖基化方法。

其中PNGase F (N-糖苷酶 F)是去除糖蛋白中幾乎所有 N-連接寡糖的最有效的酶促方法，可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白，特異性除去N-連接糖。切割位點(diǎn)為：最內(nèi)側(cè)N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺殘基之間的酰胺鍵，同時(shí)將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸。

當(dāng)α1-6巖藻糖位于GlcNAc核心時(shí)，PNGase F也可以切割；只有當(dāng)α1-3巖藻糖位于GlcNAc核心時(shí)（常見(jiàn)于植物和昆蟲(chóng)糖蛋白），PNGase F不能切割。

但常規(guī)PNGase F酶促反應(yīng)釋放抗體N-聚糖需要長(zhǎng)達(dá)幾小時(shí)，同時(shí)由于聚糖釋放存在偏好性，不完全的去糖基化可能導(dǎo)致結(jié)果的偏差，所獲得的聚糖分布不能代表治療性抗體的正確組成。因此，盡量在最短時(shí)間內(nèi)獲得準(zhǔn)確的 N-糖鏈糖譜對(duì)于抗體及抗體融合蛋白等生物治療劑生產(chǎn)過(guò)程中糖基化監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。

Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版）是一種經(jīng)過(guò)優(yōu)化的重組試劑,可以在數(shù)分鐘內(nèi)對(duì)抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進(jìn)行徹底和快速的去糖基化。此酶能夠迅速且無(wú)偏好性地去除所有的 N-糖鏈，并且可直接進(jìn)行下游的色譜或質(zhì)譜分析。翌圣Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版） 簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程，可在保證靈敏度和重復(fù)性的前提下減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

一步法蛋白質(zhì)去糖基化

兩步法蛋白質(zhì)去糖基化：

另外，我司還提供常規(guī)PNGase F，包括PNGase F, N-糖苷酶 F（Cat#20407ES，比活性：100000 U/mL），PNGase F, N-糖苷酶 F（Cat#20415ES，比活性：750000 U/mL），以及其他類型的糖苷酶，如Endo H糖苷內(nèi)切酶H（Cat#20414ES），Endo S糖苷內(nèi)切酶S（Cat#20413ES）。