蛋白純度≥99%，65℃加熱10 min即可快速失活，對樣品中RNA無影響。

在診斷或研究由病原感染引起的疾病時，當(dāng)前的檢測方法大多針對病原體的基因組進行診斷。然而，僅依靠檢測病原體的基因組核酸只能確認(rèn)病毒的存在，不足以反映持續(xù)感染或整合入宿主基因組的風(fēng)險。例如，人乳頭瘤病毒（HPV）DNA的檢出可能只是一次性感染，不代表持續(xù)病變或癌變風(fēng)險。相反，檢測HPV E6/E7 mRNA水平能提供更精確信息，評估HPV在宿主體內(nèi)的基因組整合、轉(zhuǎn)錄活性及持續(xù)感染和致癌可能性。這種方法更關(guān)注“病變”而非僅僅是“感染”，有助于識別可能進展為浸潤癌的癌前病變，避免對一次性HPV感染及其良性病變的過度探查和不必要治療。

圖1：HPV病毒感染宮頸細(xì)胞示意圖

為確?；騧RNA表達量分析的準(zhǔn)確性，必須排除樣本中基因組DNA（gDNA）的干擾，因為其存在可能導(dǎo)致mRNA定量結(jié)果的誤差，有效去除mRNA樣本中的gDNA一直是一個技術(shù)難題。目前，DNase I是主流用于去除gDNA的酶，但DNase I的滅活需要在體系中額外加入EDTA，容易導(dǎo)致后續(xù)擴增反應(yīng)受抑制。

 

翌圣Thermolabile dsDNase

針對以上問題，翌圣生物推出了一種熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶——Thermolabile dsDNase。該酶能夠選擇性地降解雙鏈DNA，而對單鏈核酸分子幾乎沒有影響。通過裂解雙鏈DNA中的磷酸二酯鍵，生成帶有5'-磷酸和3'-羥基末端的寡核苷酸片段。更重要的是，該產(chǎn)品具有熱敏感性，在65°C條件下可以迅速失活。相比傳統(tǒng)的DNase I，Thermolabile dsDNase更適合快速去除基因組DNA，并且與RT-PCR反應(yīng)緩沖液兼容，因此可以直接應(yīng)用于RT-PCR/qPCR等過程中，以清除gDNA污染，從而提高反轉(zhuǎn)錄效率。

圖2. Thermolabile dsDNase去除gDNA示意圖

 

產(chǎn)品特點

• 高效：只需37℃ 5 min即可消化1 μg基因組DNA；
• 純度高：蛋白純度≥99%；
• 無RNase酶殘留：對樣品中RNA無影響；
• 熱敏感：65℃加熱10 min即可快速失活，無需純化，gDNA去除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可在同管內(nèi)完成；
• 應(yīng)用廣泛：RNA提取或反轉(zhuǎn)錄實驗前去除gDNA、分子診斷試劑原料中背景菌gDNA污染去除。

 

性能展示

1. 純度高：蛋白純度≥99%

圖3：SDS-PAGE法檢測14544ES蛋白純度結(jié)果

2. 無RNase酶殘留：對樣品中RNA無影響

圖4：20 μL反應(yīng)體系中加入20 U來自進口廠家A、進口廠家B和翌圣3批次Thermolabile dsDNase，同時分別加入0.5 μg 293T RNA，37℃孵育4小時。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，翌圣3批次Thermolabile dsDNase組RNA譜帶與陰性對照一致，進口廠家A和進口廠家B組RNA條帶有輕微降解，說明翌圣3批次Thermolabile dsDNase中無RNase殘留，對樣本中RNA無影響。

 

3. 熱敏感：65℃加熱10 min即可快速失活

圖5：Thermolabile dsDNase熱敏感性驗證結(jié)果圖。陰性對照組：未加dsDNase酶；陽性對照組：反應(yīng)體系中加入0.2 U來自進口廠家A、進口廠家B和翌圣3批次Thermolabile dsDNase；熱處理組：反應(yīng)體系中加入20 U來自進口廠家A、進口廠家B和翌圣3批次經(jīng)過65℃加熱10 min處理的Thermolabile dsDNase酶。然后，分別在體系中加入1 μg小牛胸腺DNA，37℃孵育5 min。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，0.2 U Thermolabile dsDNase可消化1 μg小牛胸腺DNA，Thermolabile dsDNase經(jīng)過65℃孵育10 min可完全失活。

 

YEASEN相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品定位	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號
gDNA去除	Thermolabile dsDNase	14544ES
	Recombinant DNase I (RNase-free)	10325ES
	UCF.ME® Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade	10611ES
高性能PCR單酶系列	Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase, 5 U/μL	10726ES
	Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11300ES
	Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG),heat-labile, 1 U/μL	10303ES
	Murine RNase Inhibitor (40 U/µL)	10603ES
	dNTP Mix (25 mM each)	10125ES

 

參考文獻

1. Ndiaye C, Mena M, Alemany L, et al. HPV DNA, E6/E7 mRNA, and p16INK4a detection in head and neck cancers: a systematic review and meta-analysis[J]. The Lancet Oncology, 2014, 15(12): 1319-1331.
2. Broccolo F, Fusetti L, Rosini S, et al. Comparison of oncogenic HPV type‐specific viral DNA load and E6/E7 mRNA detection in cervical samples: results from a multicenter study[J]. Journal of medical virology, 2013, 85(3): 472-482.