翌圣生物研發(fā)團(tuán)隊利用一流的基因工程改造技術(shù)，研制而成的核酸污染去除的“終極武器”—全能核酸酶，既保證了產(chǎn)品的純度與酶活，又確保了產(chǎn)品的穩(wěn)定性，目標(biāo)客戶攘括工業(yè)端與科研端兩大科學(xué)研究鏈，可滿足廣大生物研究者的基本需求。
 

翌圣核酸酶，嚴(yán)格把控，品質(zhì)優(yōu)先
 

1、質(zhì)檢項目

貨號	表達(dá)宿主	活性	內(nèi)毒素	濃度	純度SDS-PAGE	純度SEC-HPLC	細(xì)菌檢測	蛋白酶檢測
翌圣20125（工業(yè)）	酵母菌	√	√	√	√	√	√	√
翌圣20156（科研）	大腸桿菌	√		√	√

 

2、質(zhì)檢結(jié)果

 

 

核酸酶超強(qiáng)特性
 

特性一：耐受性強(qiáng)

能夠與多種細(xì)胞裂解液同時使用，如RIPA；與含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。

試劑	耐受劑量	耐受程度
鹽酸胍	>100 mM	完全抑制Benzonase活性
EDTA	1 mM	部分抑制Benzonase活性
	5 mM	活性喪失90%
PMSF	1 mM	不會抑制Benzonase活性
Triton® X-100	濃度<0.4%	保持70%的活性
	濃度<0.4%<1%	活性急劇降低
	濃度＞1%	活性喪失70%
SDS	濃度在0.1%~1%	活性急劇降低
尿素	>6 M	活性急劇降低

 

特性二：操作簡易，輕松使用

1、推薦使用條件

條件參數(shù)	最佳條件	有效條件
Mg2+	1-2 mM	1-10 mM
pH	8-9	6-10
溫度	37℃	0-42℃
DTT	0-100 mM	>0 mM
巰基乙醇	0-100 mM	>0 mM
單價陽離子	0-20 mM	0-150 mM
磷酸根離子	0-10 mM	0-100 mM

2、推薦使用量

實驗類型	蛋白電泳樣品	藥物生產(chǎn)-1g	疫苗、病毒生產(chǎn)-1L	細(xì)胞培養(yǎng)-1L
推薦產(chǎn)品	Benzonase（科研級，20156）	Benzonase（無內(nèi)毒素級，20125）
最低要求	125 U（0.5 µL）	25 U/mL（1 µL）	0.1 U/mL（0.4 µL）	0.1 U/mL（0.4 µL）
建議用量	500 U（2 µL）	250 U/mL（10 µL）	25 U/mL（100 µL）	5 U/mL（20 µL）
孵育時間	通常作用時間37℃在15~60 min；25℃在30~120 min；
注：以上僅僅是推薦，可根據(jù)實驗自主摸索最優(yōu)實驗條件。

 

助陣四方，應(yīng)用甚廣
 

應(yīng)用1，除去生物制品中的DNA/RNA

全能核酸酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工業(yè)生物制品中核酸的去除，使生物制品的最終核酸含量符合要求，同時提高生物制品功效。并且研究者還提供了一種可獲得HIV測序文庫的方案HIV-SMART，其中全能核酸酶的運(yùn)用，可顯著提高HIV病毒測序覆蓋度，且不影響病毒核酸的回收率。

 圖3 （+）添加和（-）不添加全能核酸酶處理的CHU1756NGS覆蓋圖^[1]

應(yīng)用2，用于降低細(xì)胞破碎后的粘度

全能核酸酶可以降解所有形式的核酸，降低細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分離效果，使之易于過濾（尤其是超濾），利于下游層析純化操作。

圖4 細(xì)胞裂解液Benonase處理（A）和未處理（B）比較圖

應(yīng)用3，生化分析樣品的制備

在ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程中，用全能核酸酶處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，并提高回收率。

 

圖5  小鼠腦核蛋白Benonase處理（A）和未處理（B）雙向電泳比較圖^[2]

應(yīng)用4，CAR-T治療相關(guān)行業(yè)（慢病毒包裝）

 

FAQ——如何擺脫后續(xù)核酸酶干擾？
 

措施1：采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制全能核酸酶活性，極端條件會造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等；

措施2：對于帶某種標(biāo)簽的Benzonase核酸酶可通過相應(yīng)的標(biāo)簽蛋白純化樹脂直接去除，去除率>95%；

措施3：對于不帶標(biāo)簽的Benzonase核酸酶，可通過色譜純化去除核酸酶，然后可通過檢測殘留活性或ELISA檢測來判斷去除是否成功。

產(chǎn)品訂購信息
 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	價格（元）
UCF.ME Nuclease 全能核酸酶	20156ES25	25 KU	418
	20156ES50	50 KU	768
	20156ES60	100 KU	1398
UCF.ME Nuclease Ultrapure（Endotoxin-free）	20125ES25	25 KU	1125
	20125ES50	50 KU	1965
	20125ES60	100 KU	3245

 

文獻(xiàn)引用
 

[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.

[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.

 

HB200507