產(chǎn)品說明書
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
UltraNuclease（全能核酸酶），又稱非限制性核酸內(nèi)切酶、廣譜核酸酶；是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割，將核酸完全消化成2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。
本品經(jīng)基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表達(dá)純化，純度≥ 99%，可用于科學(xué)研究中降低細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白純化效率及功能研究，并且可以有效防止細(xì)胞治療和疫苗研究中人外周血單核細(xì)胞（PBMC）的結(jié)團(tuán)。
本品以無菌液體酶的形式提供，儲存于緩沖液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol）中，無色透明液體。
產(chǎn)品性質(zhì)
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來源 |
E. coli |
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分子量（Molecular Weight） |
26.5 kDa |
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等電點 |
6.85 |
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純度（Purity） |
≥ 99%（HPLC） |
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酶活（Enzyme Activity） |
250-300 U/μL |
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比活（Specific Activity） |
≥ 1.5×106 U/mg蛋白 |
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最適pH（Optimum pH） |
8.0（工作范圍pH 6-10） |
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最適溫度（Optimum Temperature） |
37℃（工作范圍0-42℃） |
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輔助因子（Cofactor） |
1-10 mM Mg2+ |
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儲存緩沖液（Storage Buffer） |
20 mM Tris-HCl pH8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol |
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活性單位定義（Unit Definition） |
在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件下，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當(dāng)于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）。 |
運輸和保存方法
干冰運輸。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
推薦使用條件
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條件參數(shù) |
最佳條件 |
有效條件 |
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Mg2+ |
1-5 mM |
1-10 mM |
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pH |
8-9 |
6-10 |
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溫度 |
37℃ |
0-42℃ |
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DTT |
0-100 mM |
>0 mM |
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巰基乙醇 |
0-100 mM |
>0 mM |
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單價陽離子 |
0-20 mM |
0-150 mM |
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磷酸根離子 |
0-10 mM |
0-100 mM |
在最佳條件下推薦的使用量及處理時間（37℃，2 mM Mg2+，pH 8.0）
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UltraNuclease用量（終濃度） |
處理時間 |
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0.25 U/mL |
> 10 h |
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2.5 U/mL |
> 4 h |
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25 U/mL |
30 min |
使用方法
1、 樣本準(zhǔn)備
貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞，去除上清。
懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用PBS清洗細(xì)胞，6,000 rpm 離心10 min，收集沉淀。
大腸桿菌：離心收集菌體，用PBS清洗1次，8,000 rpm 離心5 min，收集沉淀。
2、樣品處理
將收集到的細(xì)胞沉淀按照質(zhì)量（g）與體積（mL）比1：(10~20) 的比例進(jìn)行裂解處理，也可通過在冰上或室溫通過機械或化學(xué)方法裂解細(xì)胞（1 g細(xì)胞約為109個）。
3、酶的添加
1）添加適量MgCl2將反應(yīng)體系中的Mg2+ 濃度調(diào)整在1-5 mM范圍內(nèi)，將pH調(diào)整成8-9。
2）按照250 Units消化1 g細(xì)胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟據(jù)上表中的推薦使用量自行選定添加方案，在一定范圍內(nèi)增加酶量，消化所需時間相應(yīng)減少。
【注】全能核酸酶的酶活受離子濃度、反應(yīng)溫度及pH等因素的影響，初次使用時建議摸索最適濃度。
4、上清獲取
以12,000 rpm的轉(zhuǎn)速離心30min獲得細(xì)胞裂解液上清，再進(jìn)行后續(xù)相關(guān)實驗。
【注】若溶液為高鹽溶液，偏酸性或者偏堿性，含有較高濃度的去垢劑、變性劑，應(yīng)適當(dāng)增加酶的用量或延長孵育時間。
HB220729
