什么是感受態(tài)細胞?
感受態(tài)細胞(competent cell):是指受體(宿主)細胞最易接受外源DNA片段并實現(xiàn)其轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。主要原理是通過處理使細胞的通透性變大(細胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞),便于外源基因或載體進入感受態(tài)細胞,在感受態(tài)細胞中得到復制擴增,得到多個拷貝的外源基因或載體。
感受態(tài)細胞的分類
根據(jù)不同實驗目的,感受態(tài)細胞來源有原核受體細胞(大腸桿菌G-、乳酸菌G+、枯草桿菌G+等 )和真核受體細胞(酵母菌、動植物、昆蟲等)。大腸桿菌作為構(gòu)建普通質(zhì)粒、病毒載體和各種文庫以及異源蛋白表達的重要工具,其相應的感受態(tài)在分子克隆實驗與蛋白表達實驗中是極其重要的。
不同感受態(tài)細胞的區(qū)別是什么呢?
目前市面上的大腸桿菌細胞種類相當多,其都是為了特定的目的而構(gòu)建的,比如:高速生長/分裂,高通量克隆,普通克隆等。那不同的感受態(tài)之間的區(qū)別是什么呢?答案是基因型(即感受態(tài)的身份證),不同基因型的大腸桿菌可以滿足不同的實驗目的。
感受態(tài)細胞說明書的基因型部分寫的recA,deoR,lacZ,DE3,pLysS都代表什么意義呢?今天小翌根據(jù)幾個方向的實驗目的給大家介紹一些常見的基因型以及意義。
提高外源質(zhì)粒的完整性和穩(wěn)定性
提高轉(zhuǎn)化效率
代謝相關基因型
不同的蛋白表達機制
以上是眾多細胞基因型中的一小部分,還有很多不常見的變異菌株,可適用于更加特殊的實驗目的,小翌就不過多介紹了。
對于感受態(tài)細胞的選擇,小翌給大家介紹下幾種常見的大腸桿菌感受態(tài)細胞及其應用方向。
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