細胞膜熒光探針系類產(chǎn)品
細胞膜熒光探針是一種能夠特異性地染色或結(jié)合于細胞膜的化學(xué)物質(zhì)，能夠通過熒光顯微鏡等技術(shù)觀察和研究細胞膜的結(jié)構(gòu)、動態(tài)變化及環(huán)境變化等。細胞膜熒光探針有：
1. 熒光素（Fluorescein）：具有良好的熒光性能，可用于細胞膜的染色。常用的熒光素探針有5-（和6-）氯甲基熒光素、5（6）-羧乙基熒光素等。
2. 磷脂類熒光探針：由于磷脂類化合物主要存在于細胞膜中，因此可以用于研究細胞膜的組成和性質(zhì)。常用的磷脂類熒光探針包括熒光磷脂、熒光膽固醇、NBD-磷脂等。
3. 硫脲類熒光探針：能夠與細胞膜蛋白結(jié)合，常用于研究細胞膜蛋白的分布和結(jié)構(gòu)。常用的硫脲類熒光探針包括AEDANS、IAEDANS、BODIPY-TMR等。
4. 離子感受器：如熒光鈣離子探針（如Fura-2、Fluo-3等）、熒光鈉離子探針（如SBFI）、熒光氫離子探針（如acridine orange）等，能夠用于研究細胞膜內(nèi)離子濃度的變化。
細胞膜熒光探針的選擇要根據(jù)研究對象和所需熒光成像技術(shù)的特點進行合理選擇。
（一）常用細胞膜熒光探針
DiI, DiO, DiD, DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進入細胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強。且具有消光系數(shù)高、極性依賴性、激發(fā)態(tài)壽命短等特點。一旦進入細胞膜后，可在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。
不同的熒光染色（DiI橙色熒光；DiO綠色熒光；DiD紅色熒光；DiR深紅色熒光）為活細胞多標(biāo)、流式分析提供了便利：
1）DiO和DiI可分別用標(biāo)準(zhǔn)的FITC濾光片和TRITC濾光片檢測。
2）DiD是DiI的衍生物，具有明顯往紅光遷移的激發(fā)和發(fā)射光譜，可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，這一特性使其特別適合標(biāo)記具顯著自熒光效應(yīng)的細胞或組織。
3）DiR具強效的近紅外光穿透細胞或組織，并在近紅外區(qū)具較低的自熒光水平，這些特性使其特適用于體內(nèi)成像或示蹤實驗。
Ø 顯微鏡檢測
(1) DiD，DiO，DiI，DiR激發(fā)波長與發(fā)射波長：
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DiD |
激發(fā)波長Ex (nm) |
644 |
發(fā)射波長Em (nm) |
663 |
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DiO |
激發(fā)波長Ex (nm) |
484 |
發(fā)射波長Em (nm) |
501 |
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DiI |
激發(fā)波長Ex (nm) |
549 |
發(fā)射波長Em (nm) |
565 |
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DiR |
激發(fā)波長Ex (nm) |
748 |
發(fā)射波長Em (nm) |
780 |
(2)多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：
a) DiI和DiO=Omega XF52，Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92，Chroma 51007;
c) DiI，DiO和DiD=Omega XF93，Chroma 61005
Ø 流式細胞儀的檢測
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。
（二）細胞示蹤——紅色熒光探針CM-DiI
CM-Dil通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細胞，有著強而穩(wěn)定的紅色熒光（激發(fā)峰553nm/發(fā)射峰570nm）。
與Dil不同，它水溶性更好，所以對于細胞染色更為方便有效；它的CM基團（即氯甲基替代基團）能與多肽及蛋白上的巰基反應(yīng)從而使該分子在醛類物質(zhì)中保持穩(wěn)定，所以CM-Dil標(biāo)記細胞后再進行固定、破膜及石蠟包埋操作都不會影響其熒光，是免疫熒光、免疫組化和原位雜交中理想的細胞熒光標(biāo)記染料。
另外，CM-DiI 對細胞無毒，且穩(wěn)定長效，能很好地長期示蹤細胞。研究證實，CM-DiI標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達98%以上，標(biāo)記細胞形態(tài)良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。
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骨髓單核細胞CM-DiI染色圖像 (x100) |
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（三）細胞增殖示蹤——綠色熒光探針CFDA SE
CFDA SE的全稱為Carboxyfluorescein diAcetate, succinimidyl ester，是一種近年來被廣泛應(yīng)用的細胞增殖檢測用熒光探針，也可以用于細胞的熒光示蹤。
基于CFDA SE熒光標(biāo)記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測結(jié)果完全一致，但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細胞的其它相關(guān)信息。
CFDA SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標(biāo)記細胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達數(shù)個月。CFDA SE標(biāo)記細胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。
由于CFDA SE標(biāo)記細胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數(shù)較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到。CFDA SE標(biāo)記細胞呈綠色熒光，檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為518nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標(biāo)記的細胞也可以用熒光顯微鏡進行觀察。
CFDA SE標(biāo)記的細胞無論在體外還是體內(nèi)都不會使鄰近細胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標(biāo)記后不會從一個細胞轉(zhuǎn)移到鄰近細胞。
目前CFDA SE標(biāo)記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測，甚至還可以用于細菌增殖的檢測。
產(chǎn)品訂購
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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40718ES50 |
50μg |
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40718ES60 |
2×50μg |
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40718ES72 |
5×50μg |
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40725ES10 |
10mg |
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40726ES10 |
10mg |
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40756ES10 |
10mg |
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40757ES25 |
25mg |
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40758ES25 |
25mg |
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40715ES25 |
25mg |
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40714ES76 |
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒 |
500T |
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40714ES80 |
1000T |
