產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

天然蛋白L（Protein L）是從馬格努斯消化鏈球菌分離出來(lái)的能和免疫球蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，分子量為36 KD。本產(chǎn)品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了與抗體k鏈結(jié)合的特性，同時(shí)也不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。與 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能廣泛地結(jié)合各種來(lái)源及亞類的抗體，包括人、小鼠、大鼠、兔和雞，但不結(jié)合牛、山羊或綿羊來(lái)源的免疫球蛋白。

rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分離和純化單克隆抗體的通用性親和層析介質(zhì)，產(chǎn)品以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，重組Protein L為配基，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，可以在相對(duì)較高的流速下進(jìn)行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶。利用本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)一步親和層析，可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應(yīng)用廣泛。

本品rProtein L 4FF Chromatography Column，1 mL是一種裝填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中壓預(yù)裝柱，規(guī)格1 mL，預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA 等，方便客戶操作。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	36415ES03 / 36415ES08
規(guī)格	1 mL /5×1 mL

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

基質(zhì)（Matrix）	高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球
配體（Ligand）	重組蛋白L
孔徑（Bead size）	45-165 µm
最大流速（Flowmax）	0.3 MPa, 3 bar
儲(chǔ)存緩沖液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS
載量（Capacity）	＞15 mg Mouse IgG/mL基質(zhì)
pH范圍（pH range）	3-10

 

儲(chǔ)存條件

 

2~8℃保存，有效期2年。

 

需準(zhǔn)備試劑

 

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾除菌。

平衡/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl，20 mM Na₂HPO₄，pH 7.0

洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0

中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

 

使用說(shuō)明

 

【注】上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值，可以用平衡/洗雜緩沖液對(duì)血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用平衡/洗雜緩沖液透析。樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。

1. 樣品純化（以Akta為例）

1）準(zhǔn)備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱下端口接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液。

3）平衡：用5倍柱體積的平衡Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1-5 mL/min，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測(cè)。

【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。

5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測(cè)。

6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?lái)。也可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。

7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的平衡Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

2. SDS-PAGE檢測(cè)

將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)，判定其純化效果。

3. 填料清洗

rProtein L 4FF Chromatography Column可以重復(fù)使用而無(wú)需再生，但隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降，影響柱子的性能，這時(shí)需對(duì)柱子進(jìn)行清洗：

1）去除沉淀或變性物質(zhì)

用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。

2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2. 所有操作過(guò)程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。