MolPure? Magnetic FFPE DNA Kit磁珠法石蠟包埋組織DNA提取試劑盒（瓶裝）V2
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit適用于從福爾馬林固定石蠟包埋組織（FFPE）中分離純化出高質(zhì)量的DNA。本試劑盒使用非二甲苯脫蠟液，安全、簡(jiǎn)單、快速地提取基因組DNA，提取產(chǎn)物適用于各種下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)，如 qPCR 和二代測(cè)序等。本產(chǎn)品可配合磁珠法自動(dòng)化提取儀使用，實(shí)現(xiàn)核酸的高通量提取。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
18375ES50 |
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規(guī)格 |
50 T |
組分信息
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類(lèi)別 |
組分編號(hào) |
組分名稱(chēng) |
18375ES50 |
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PartⅠ |
18375-A |
蛋白酶K溶液（20 mg/mL） |
1 mL/支×2 |
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18375-B |
磁珠懸浮液 |
1 mL/支×1 |
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PartⅡ |
18375-C |
脫蠟液 |
18 mL/瓶×1 |
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18375-D |
裂解液 |
12 mL/瓶×1 |
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18375-E |
結(jié)合液 |
15 mL/瓶×1 |
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18375-F |
洗滌液A |
18 mL/瓶×1 |
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18375-G |
洗滌液B |
20 mL/瓶×1 |
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18375-H |
洗滌液C |
18 mL/瓶×1 |
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18375-I |
洗脫液 |
5 mL/瓶×1 |
注意：使用前洗滌液A（18375-F）每瓶需加入27 mL無(wú)水乙醇，洗滌液C（18375-H）每瓶需加入72 mL無(wú)水乙醇。
儲(chǔ)存條件
1.PartⅠ室溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期12個(gè)月；
2.PartⅡ室溫運(yùn)輸，室溫避光保存，有效期12個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
- 第一次使用前應(yīng)按試劑瓶標(biāo)簽說(shuō)明在洗滌液A和洗滌液C中加入無(wú)水乙醇 ，充分混勻后使用，并在標(biāo)簽的方框中打勾做好“乙醇已加”的標(biāo)記。
- 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將水浴鍋或金屬浴預(yù)熱至60℃。
- 使用前請(qǐng)檢查脫蠟液、裂解液和結(jié)合液是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)于56℃水浴重新溶解。
操作方法
一、樣本前處理
1. 用手術(shù)刀切除石蠟組織標(biāo)本上多余的石蠟，將組織塊切成5～10 μm的薄片。
注意：如果組織表面暴露在空氣中，須丟棄開(kāi)始的2-3片組織切片。
- 收集1～8片組織切片裝入一個(gè)1.5 mL離心管中，加入300 μL脫蠟液，60℃ 孵育6 min，立即渦旋 20 s讓石蠟充分溶解。
- 依次加入225 μL裂解液，20 μL蛋白酶K溶液，渦旋振蕩10 s，12000 rpm，25℃離心1 min。
注意：a. 如果樣品量多可增加脫蠟液至500 μL。
b. 脫蠟液低于18℃會(huì)凝固，如果凝固請(qǐng)于56℃水浴鍋加熱復(fù)溶。
4. 60℃孵育1 h（期間可以旋渦振蕩數(shù)次幫助組織溶解）。
5. 90℃水浴1 h（60℃孵育后的樣品可置于室溫，直至水浴鍋或金屬浴溫度達(dá)到90℃后再把樣品置于90℃孵育）。
6. 12,000 rpm離心1 min，使用 200 μL 槍頭沿管壁小心吸取下層水相200 μL到新的1.5 mL離心管中。
7. （選做）若殘留 RNA 對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)有影響，可加入 5 μL RNase A 溶液(100 mg/mL)（自備，Yeasen Cat No.10406），振蕩混勻，室溫放置 5-10 min。
8. 加入20 μL 蛋白酶K溶液，渦旋混勻10 s，短暫離心后于65℃孵育15 min。
9. 短暫離心后即得到待用樣本混合液。
二、手動(dòng)提取步驟
1. 向上述待用樣本混合液加入300 μL結(jié)合液，350 μL異丙醇，渦旋混勻。
2. 加入20 μL磁珠懸浮液，渦旋混勻，置于旋轉(zhuǎn)混勻儀上孵育10 min。
注意：磁珠懸浮液使用前需充分渦旋混勻，保證磁珠徹底重懸，每加樣幾次后需充分搖勻后繼續(xù)加樣。
- 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附，小心吸棄液體。
- 加入700 μL 洗滌液A（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），渦旋混勻2 min，確保磁珠分散。
- 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附，小心吸棄液體。
- 加入400 μL 洗滌液B，渦旋混勻1 min，室溫靜置3 min。
- 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附，小心吸棄液體。
- 加入700 μL 洗滌液C（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），渦旋混勻2 min，確保磁珠分散。
- 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附，小心吸棄液體。
- 重復(fù)“二、手動(dòng)提取步驟”中的步驟8和9。
- 再次離心，盡量吸出殘留液體，將離心管敞口室溫放置5 min，使乙醇揮發(fā)干凈。
注意：晾干至磁珠表面剛出現(xiàn)龜裂即可，過(guò)度干燥不利于核酸洗脫。
- 將離心管從磁力架上取下，加入70 μL洗脫液，渦旋混勻。短暫離心后，65℃孵育8 min，期前可渦旋混勻以提高洗脫效率。
- 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置，待磁珠完全吸附，小心將DNA溶液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，注意不要吸到
磁珠。
- 核酸溶液保存于-20℃，長(zhǎng)期保存需放置于-80℃。
Ver.CN20240311
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