產(chǎn)品簡介

 

MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit  適用于從0.3-4 mL的血漿、血清樣本中的提取游離DNA。本產(chǎn)品采用獨特的磁珠和精心優(yōu)化的緩沖體系，可最大限度的純化回收游離DNA（每毫升血漿通常為1-100 ng）。提取的核酸產(chǎn)量高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，最大限度的去除抑制物，適用于各種下游應用實驗，如建庫、二代測序、qPCR等。

 

組分信息

 

類別	編號	組分名稱	18382ES20	18382ES50	18382ES70
Part I	18382-A	蛋白酶K溶液（20 mg/mL）	1 mL/支×1	1.25 mL/支×2	10 mL/瓶×1
	18382-B	磁珠懸浮液	600 μL/支×1	750 μL/支×2	6 mL/瓶×1
Part II	18382-C	裂解液	1 mL/支×1	2.5 mL/瓶×1	10 mL/瓶×1
	18382-D	結合液	25 mL/瓶×1	65 mL/瓶×1	125 mL/瓶×2
	18382-E	洗滌液A	32 mL/瓶×1	80 mL/瓶×1	320 mL/瓶×1
	18382-F	洗滌液B	45 mL/瓶×1	110 mL/瓶×1	440 mL/瓶×1
	18382-G	洗脫液	2 mL/瓶×1	5 mL/瓶×1	15 mL/瓶×1

 

儲存條件

 

Part I組分2~8℃保存，有效期18個月。

Part II組分室溫保存，有效期18個月。

 

實驗前準備

 

自備設備和試劑：磁性分離架（適用于1.5 mL和15 mL離心管），水浴鍋或金屬浴，渦旋振蕩器，旋轉(zhuǎn)混勻儀，1.5 mL和15 mL離心管等。

 

使用說明

 

不同體積樣本所用試劑體積如下表    

試劑	血漿/血清體積
	300 μL	1 mL	2 mL	4 mL
蛋白酶K	15 μL	50 μL	100 μL	200 μL
血漿樣本	300 μL	1 mL	2 mL	4 mL
樣本裂解液	15 μL	50 μL	100 μL	200 μL
結合液	375 μL	1.25 mL	2.5 mL	5 mL
磁珠懸浮液	9 μL	30 μL	60 μL	120 μL
洗脫體積	10～20ul	30 μL	50 μL	50～80μL

A:手動法提取操作步驟

以2 mL樣本操作為例：

1. 根據(jù)上表，向15 mL離心管中加入2 mL血漿樣本和100 μL蛋白酶K，顛倒混勻后加入100 μL裂解液，短暫渦旋混勻后，60 ℃孵育20 min，期間需上下顛倒混勻2-3次。
2. 冷卻至室溫(5～10 min)，向離心管中加入2.5 mL結合液和60 μL磁珠（充分渦旋震蕩混勻），短暫渦旋混勻，室溫中速旋轉(zhuǎn)孵育10 min。
3. 將上述離心管轉(zhuǎn)移至磁力架中，靜置約5 min觀察到磁珠完全吸附在管壁上，小心吸除上清液。
4. 向上述離心管中加入800 μL洗滌液A，渦旋振蕩20 s使磁珠徹底分散，將磁珠和洗滌液A全部轉(zhuǎn)移至潔凈的1.5 mL離心管中，并保留該15 mL離心管以供步驟5潤洗。
5. 將1.5 mL離心管放入磁力架中，靜置約1 min，待溶液澄清后，吸取上清液轉(zhuǎn)移至步驟4保留15 mL離心管中進行潤洗，并將其全部轉(zhuǎn)移至包含磁珠的1.5 mL離心管中，待溶液澄清后小心吸棄上清液。
6. 向1.5 mL離心管中加入800 μL洗滌液A，渦旋振蕩20 s，瞬時離心后將離心管轉(zhuǎn)移至磁力架，待溶液澄清后小心吸棄上清液。
7. 向離心管中加入1 mL洗滌液B，渦旋振蕩1 min。
8. 瞬時離心后將離心管轉(zhuǎn)移至磁力架，待溶液澄清后小心吸棄上清液。
9. 重復步驟7-8。
10. 短暫離心后將離心管放置在磁力架上，小心吸除殘余液體。
11. 開蓋室溫放置2～5 min使乙醇充分揮發(fā)，觀察到磁珠表面無液體或剛出現(xiàn)龜裂即可。（注：磁珠不能過度干燥，過度干燥會導致洗脫效率下降。若室溫過低可適當延長晾干時間。）
12. 向晾干后的離心管中加入洗脫液，渦旋振蕩5 min，短暫離心后將離心管置于磁力架上直至磁珠徹底吸附，收集洗脫液（注意不要吸到磁珠）。
13. 核酸溶液短期保存于-20 ℃，長期保存需放置于-80 ℃。

 

注意事項

 

1. 注意觀察各溶液是否有析出或渾濁（尤其是裂解液，結合液組分），如有渾濁可40 ℃加熱處理使溶液澄清。

2. 磁珠應4℃冷藏保存，避免凍存或反復凍融，以免影響使用效果。

3. 洗脫時可能存在磁珠殘留，吸取核酸時應盡量避免吸入磁珠。

4. 樣本保存時間過長、血漿含有基因組核酸或者樣本在室溫放置過久均會導致目標核酸得率降低。為了保證提取得率，樣本可以是新鮮、冷凍狀態(tài)下未經(jīng)凍融或者在cf DNA保存管中有效保存的血漿和血清。血漿的分離與儲存建議見附錄1。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

6. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

 

Ver. CN20240921