產品簡介

 

抗氧化能力的強弱與健康狀態(tài)存在著密切聯系，機體防御體系有酶促與非酶促兩個體系，許多酶是以微量元素為活性中心，例如：超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽S-轉移酶等，非酶促反應體系中主要為維生素、氨基酸和金屬蛋白質等?？寡趸蠓肿?、抗氧化小分子和酶的總水平可體現體系內的總抗氧化能力，因此測定血漿、血清、尿液、唾液等各種體液，細胞或組織等裂解液中的總抗氧化能力具有非常重要的生物學意義。

該試劑盒用于測定樣本中的總抗氧化能力（T-AOC），適用于血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織裂解液、植物或中草藥提取物以及各種抗氧化物溶液，作用原理基于機體中有許多抗氧化物質，能使Fe³⁺還原成Fe²⁺，后者可與菲啉類物質形成穩(wěn)固的絡合物，通過比色可測出其抗氧化能力的高低。

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	規(guī)格	儲存條件	備注
60742-A	試劑一	60 mL	2～8℃	Part 1
60742-B	試劑二	粉劑×1支	2～8℃
60742-C	試劑三	3 mL+30 mL	2～8℃，避光保存
60742-D	試劑四	12 mL	室溫	Part 2
60742-E	試劑五	12 mL	室溫，如凝固，需溶解至澄清透亮后使用

 

儲存條件

 

2～8℃避光保存，有效期6個月。

 

使用說明

 

【注：正式測定前建議取2-3個預期差異較大的樣本做預測定，且本試劑盒不建議使用酶標儀讀數。】

1 準備儀器與試劑

分光光度計（520 nm）、1 cm光徑比色皿、37℃恒溫水浴鍋、臺式低速離心機、移液器、雙蒸水、生理鹽水（0.9%）或PBS（0.1 M）、渦旋混勻器、離心管。

2 試劑的前處理

1）試劑二的處理：加雙蒸水120 mL充分溶解，如需加快溶解，可以在37℃水浴溶解，配成試劑二應用液。

2）試劑三的處理：3 mL的貯備液與30 mL的稀釋液按1:9的比例，現用現配，配成試劑三應用液。

3 樣品的前處理

1)血漿樣本的前處理

血漿在測試前3500轉／分，離心10分鐘，取上清待測；肝素抗凝的血漿、血清不需要離心。

2）組織樣本的前處理

準確稱取組織重量，按重量(g):體積(mL)=1:9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下，制備成10%的勻漿液，2500轉/分，離心10分鐘，取上清液待測（同時需要測定勻漿蛋白濃度，推薦使用20202ES）。

3）細胞樣本的前處理

將培養(yǎng)細胞消化，離心，棄上清，留下層細胞，用生理鹽水或勻漿介質制備成10⁷/cm³的懸液，即10⁷/mL的懸液，再進行破碎，制備好的細胞懸液不需要離心，在測試加樣前要搖勻后取樣。【破碎細胞的方法：①勻漿器勻漿。②超聲粉碎器粉碎。③反復凍溶3次?！?/font>

4）培養(yǎng)細胞的上清及部分體液均可以按照血清樣本處理，一般直接加樣。

5）全血樣本前處理：一般用雙蒸水10倍稀釋。

4 操作步驟

1)調節(jié)波長：分光光度計（比色測定波長為520 nm）。

2)血清(漿)中T-AOC的測定

試劑	測定管（mL）	對照管（mL）
試劑一	1.0	1.0
血清(漿)	0.1
試劑二應用液	2.0	2.0
試劑三應用液	0.5	0.5
旋渦混勻器充分混勻，37℃水浴30分鐘。
試劑五	0.1	0.1
血清(漿)		0.1
混勻，25～37℃放置10分鐘，波長520 nm，1 cm 光徑，雙蒸水調零，測定各管吸光度值。

單位定義及計算公式：

定義：在37℃時，每分鐘每毫升血清（漿）使反應體系的吸光度（OD）值每增加0.01時，為一個總抗氧化能力單位（U）。

計算公式：

總抗氧化能力（U/mL）=(A測定-A對照）÷0.01÷T x V反總÷V樣 x N

T：反應時間，30 min；V反總：反應體系總體積，mL；V樣：取樣量，mL；N：樣本測試前稀釋倍數。

3)組織中T-AOC的測定

試劑	測定管（mL）	對照管（mL）
試劑一	1.0	1.0
待測樣本	10%組織勻漿參考取樣量：0.1～0.2 mL
試劑二應用液	2.0	2.0
試劑三應用液	0.5	0.5
旋渦混勻器充分混勻，37℃水浴30分鐘。
試劑四	0.2	0.2
待測樣本		10%組織勻漿參考取樣量：0.1～0.2 mL
試劑五	0.2	0.2
混勻，25～37℃放置10分鐘，波長520 nm，1 cm 光徑，雙蒸水調零，測定各管吸光度值。

定義：在37℃時，每分鐘每毫克組織蛋白，使反應體系的吸光度（OD）值，每增加0.01時， 為一個總抗氧化能力單位（U）。 計算公式：

總抗氧化能力（U/mgprot）=(A測定-A對照）÷0.01÷T x V反總÷V樣 ÷ Cpr

T：反應時間，30 min；V反總：反應體系總體積，mL；V樣：取樣量，mL；Cpr：組織勻漿蛋白濃度，mgprot/mL(prot指蛋白)。

4)全血中T-AOC的測定

試劑	測定管（mL）	對照管（mL）
試劑一	1.0	1.0
待測樣本	0.05
試劑二應用液	2.0	2.0
試劑三應用液	0.5	0.5
旋渦混勻器充分混勻，37℃水浴30分鐘。
試劑四	0.1	0.1
待測樣本		0.05
混勻，25～37℃放置10分鐘，波長520 nm，1 cm 光徑，雙蒸水調零，測定各管吸光度值。

定義：在37℃時，每分鐘每毫升全血，使反應體系的吸光度（OD）值每增加0.01時，為一 個總抗氧化能力單位（U）。

計算公式：

總抗氧化能力（U/mL）=(A測定-A對照）÷0.01÷T x V反總÷V樣 x N

T：反應時間，30 min；V反總：反應體系總體積，mL；V樣：取樣量，mL；N：樣本測試前稀釋倍數。

5）簡單操作法

a混合試劑的配制：試劑一:試劑二:試劑三＝1:2:0.5的比例進行配制，現用現配(最好配完即用，剩余的丟棄)

b血清（漿）、全血簡便操作表：

試劑	對照管（mL）	測定管（mL）
待測樣本		0.1
混合試劑	3.5	3.5
旋渦混勻器充分混勻，37℃水浴30分鐘。
試劑四	0.1	0.1
待測樣本	0.1
混勻，25～37℃放置10分鐘，波長520 nm，1 cm 光徑，雙蒸水調零，測定各管吸光度值。

c組織樣本簡便操作表：

試劑	對照管（mL）	測定管（mL）
組織勻漿		10%組織勻漿參考取樣量：0.1～0.2 mL
混合試劑	3.5	3.5
旋渦混勻器充分混勻，37℃水浴30分鐘。
試劑四	0.2	0.2
組織勻漿	10%組織勻漿參考取樣量：0.1～0.2 mL
試劑五	0.2	0.2
混勻，25～37℃放置10分鐘，波長520 nm，1 cm光徑，雙蒸水調零，測定各管吸光度值。

 

注意事項

 

1. 不建議使用酶標儀讀數。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3. 本產品僅作科研用途！

Ver.CN20241104