產(chǎn)品簡介

 

過氧化氫（H₂O₂）是一種活性氧化代謝的副產(chǎn)物，在許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中過氧化氫都是一種關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子。過氧化氫作為一種活性氧物質(zhì)，能夠觸發(fā)包括NF-kappaB在內(nèi)的多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活，這些信號通路與多種疾病的發(fā)生發(fā)展有著緊密的聯(lián)系，如哮喘、炎癥性關(guān)節(jié)炎、動脈硬化和神經(jīng)退行性疾病等，過氧化氫也和細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖等密切相關(guān)。

該試劑盒可以測定動物組織、血清、血漿、其它生物體液、細(xì)胞、植物組織等的過氧化氫濃度，其原理是過氧化氫（H₂O₂）可以與鉬酸作用生成一種絡(luò)合物，405 nm處測根據(jù)其生成量可計算出H₂O₂的量。

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	規(guī)格	儲存條件
60743-A	試劑一	60 mL	2～8℃
60743-B	試劑二	60 mL	2～8℃，如有結(jié)晶，熱水溶解后使用。
60743-C	H2O2標(biāo)準(zhǔn)品	5 mL	2～8℃

 

儲存條件

 

2～8℃避光保存，有效期6個月。

 

使用說明

 

【注：正式測定前建議取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。若吸光度大于0.8需要稀釋樣本，若吸光度小于0.05需要增加取樣量，對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)管中的標(biāo)準(zhǔn)品與空白管中的雙蒸水均要同樣量增加，但是標(biāo)準(zhǔn)品要作相應(yīng)稀釋后再增加量】

1 準(zhǔn)備儀器

分光光度計或酶標(biāo)儀(405 nm)、臺式離心機(jī)、移液器、雙蒸水、生理鹽水（0.9%）或PBS（0.1M）、渦旋混勻器。

2 試劑的前處理

H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)品︰雙蒸水按1︰9的比例配成163 mmol/L H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)品溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3 樣品的前處理

1）血清/血漿等液體樣本可直接測定，如超過線性范圍可稀釋后測定；細(xì)胞培養(yǎng)液則吸取部分，8000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘后取上清液檢測。

2）動物組織樣本的前處理

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）：體積（mL）=1：9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，12000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液待測（上清液需要測定其蛋白濃度，推薦使用20200ES/20201ES）。

3. 細(xì)胞樣本的前處理

收集細(xì)胞后，每份細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)量盡量不要低于 10⁶個，越多越好）加入0.3 mL的生理鹽水（或者PBS 41403ES），冰水浴下超聲破碎（200-300 W，運行5秒，間隔15秒，反復(fù)3-5次），12000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液待測（上清液需要測定其蛋白濃度，推薦使用20200ES/20201ES）。

4）植物/藥材樣本的前處理

水分含量較高的植物建議用方法二，水分含量低建議用方法一處理。

方法一

將植物組織用PBS擦洗干凈后用吸水紙吸干，剪碎放入研缽，加液氮研磨成粉，稱取植物粉末，按重量(g):體積(mL)=1:9的比例加入9倍體積的PBS（41403ES），渦旋震蕩或研磨儀研磨1分鐘，12000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液待測。

方法二

植物組織用PBS擦洗干凈后用吸水紙吸干，不研磨成粉，按重量(g):體積(mL)=1:9的比例,加入9倍體積的PBS（41403ES），冰水浴條件下機(jī)械勻漿，12000轉(zhuǎn)/分，離心10 分鐘，取上清液待測。

4 操作步驟

1）調(diào)節(jié)波長：分光光度計/酶標(biāo)儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為405 nm）。

2）按操作表依次加入各試劑。

試劑	空白管（mL）	標(biāo)準(zhǔn)管（mL）	測定管（mL）
試劑一	1.0	1.0	1.0
雙蒸水	0.1
163 mmol/L H2O2標(biāo)準(zhǔn)品		0.1
樣本			0.1
試劑二	1.0	1.0	1.0
混勻，于405 nm處，1 cm光徑，雙蒸水調(diào)零，測各管吸光度值A(chǔ)。

5 計算公式

1)液體樣本計算公式

H₂O₂(mmol/L)=(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)x C標(biāo)準(zhǔn)x N

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液濃度163 mmol/L；N：樣本測試前稀釋倍數(shù)。

2)動物組織/細(xì)胞樣本計算公式

H₂O₂(mmol/gprot)=(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)x C標(biāo)準(zhǔn)÷ Cpr

Cpr：組織勻漿蛋白濃度，gprot/L（prot指蛋白）

3)組織中樣本計算公式

H₂O₂(mmol/g鮮重)=(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)x C標(biāo)準(zhǔn)÷（W÷V樣總）

W：組織樣本質(zhì)量，g；V樣總：樣本前處理（勻漿）時，加入的勻漿介質(zhì)的體積，L。

 

注意事項

 

1. 有些樣本因其本身帶有一定的顏色或者濁度，需在操作表的基礎(chǔ)上加測一個樣本的對照管（即0.1 mL樣本+2 mLPBS，混合后405 nm處讀數(shù)，計算時A測定先減去A對照，再代入計算）。
2. 細(xì)胞中過氧化氫較低，建議細(xì)胞數(shù)越多越好（最低不低于10⁶個）。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

Ver.CN20240829