產品簡介

 

Mouse CD8 Nanobeads可以用于基于CD8抗原表達小鼠細胞分離。CD8在所有T細胞上表達，并與T細胞受體相關，本產品由CD8單克隆抗體與納米級磁珠偶聯(lián)而成，從而實現(xiàn)CD8陽性T細胞的分選，一般用于從小鼠淋巴結、脾臟及其混合樣本中分離、純化CD8陽性T細胞。

其原理是小鼠CD8分選磁珠直接與細胞結合后，將細胞與磁珠混合懸浮液加載到放置在MACS Separator的分離磁鐵中的MS或LS柱，或其他合適的分選柱中。磁分離后留在磁柱中的細胞即為陽性分選的CD8表達細胞，從而進行后續(xù)的相關實驗研究；也可收集分離的下清液，即為陰性分選的無CD8表達細胞。

 

產品信息

 

貨號	37611ES01 / 37611ES05
規(guī)格	100 µL / 2 mL
分選能力	Up to 5×107 cells / Up to 1×109 cells

 

產品性質

 

基質（Matrix）	葡聚糖納米磁珠
配體（Ligand）	Anti-Mouse CD8 antibody
粒徑（Particle Size）	50-100 nm
分選能力（Separation Capacity）	Up to 5×108 cells/mL beads
儲存緩沖液（Storage Buffer）	1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% BSA buffer without Ca2+

 

儲存條件

 

2~8℃避光保存，有效期6個月。

 

使用說明

 

一、所需材料準備

1. 分離緩沖液：1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% BSA（牛血清白蛋白）buffer without Ca²⁺，2~8℃保持冷卻。

【注】：不推薦使用含有Ca²⁺或Mg²⁺的PBS。

        BSA可以被HSA（人血清白蛋白）、人血清或胎牛血清（FBS）替代，EDTA可以被檸檬酸鈉替代。

2. 分選柱和分離器：MS或LS柱，或其他合適的分選柱。MACS Separator的分離磁鐵。

二、樣品準備

1. 制備淋巴細胞的單細胞懸液，確定細胞數(shù)。
2. 將細胞懸浮液在300 g 轉速下離心 10 分鐘，完全吸取上清液。
3. 按照1x10⁷個細胞用80 μL緩沖液重懸細胞顆粒 (可以提前用30 μm細胞過濾網(wǎng)去除粘連的、大塊裝的細胞), 每1x10⁷個細胞加入20 μL 小鼠CD8分選磁珠，用于小鼠CD8陽性細胞分離。如果希望同時標記CD8和另一種CD蛋白，建議使用 60 μL 緩沖液重懸細胞顆粒，并加入20 μL CD8分選磁珠和20 μL另一種CD蛋白的抗體分選磁珠。(每1x10⁷個細胞)

     4.混合均勻，并在冰箱中孵育15分鐘(2~8℃)。

     5.每1x10⁷細胞加入1-2 mL的緩沖液清洗細胞，然后300 g離心10分鐘，完全吸出上清液。

     6.在500 μL的緩沖液中重新懸浮最多1x10⁸個細胞，對于 1x10⁷或更少的細胞重懸于50 μL的緩沖液中，對于更高的細胞數(shù)量，相應地增加緩沖液體積。

三、磁性細胞分離

1.使用MS或LS柱進行磁分離。

2.將分選柱置于合適的MACS Separator的分離磁鐵中。

3.用適量緩沖液沖洗色譜柱，MS: 500 μL，LS: 3 mL。

4.將細胞懸浮液滴在分選柱上，收集含有未標記細胞的流出液。

5.用適量緩沖液沖洗分選柱，收集通過的未標記細胞，并與步驟4）的流出液混合。MS: 3X500 μL，LS:3x3 mL。

【注】：一旦分選柱儲液器空，就立即加入等量的緩沖液進行清洗步驟。

6.從分離磁鐵中取出分選柱，將其置于合適的收集管中。將適量的緩沖液移到分選柱上。將柱塞推入分選柱并沖出磁性標記的細胞。MS: 1 mL，LS: 5 mL。

7.然后可以對細胞進行計數(shù)，并分析以評估其純度或用于下游應用。不需要移除分選磁珠。為確保細胞活性，應將所需的細胞立即重新懸浮在細胞培養(yǎng)基中。

 

注意事項

 

1.我司不建議在磁性分選結束前使用熒光標記。因為磁選和熒光抗體適配性需要驗證，使用不適配熒光標記可能會影響磁性分離的效果。磁選后的正、負細胞樣品可以正常使用熒光標記做流式細胞分析。

2. 本產品僅作科研用途！

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

 

 

Ver.CN20250114