細(xì)菌內(nèi)毒素可引起機(jī)體免疫功能受損，嚴(yán)重者可引發(fā)膿毒性休克，急性呼吸窘迫綜合癥，彌散性血管內(nèi)凝血，全身炎癥反應(yīng)綜合癥或致命性多器官功能衰竭等。因此對(duì)于用于疾病治療的基因藥物、蛋白藥物、單抗克隆藥物、治療性疫苗、小分子化學(xué)藥物等生物制品必須通過(guò)一定的方法去除內(nèi)毒素。

本試劑盒使用一類高效內(nèi)毒素去除樹(shù)脂，它以生物安全性極高的內(nèi)毒素特異吸附物質(zhì)為配體，經(jīng)此親和樹(shù)脂純化，樣品最終的內(nèi)毒素水平可＜0.1EU/ml。而且經(jīng)過(guò)親和純化后沒(méi)有對(duì)人體有毒害物質(zhì)殘余，適合抗體、疫苗等生物制品的內(nèi)毒素去除。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

親和樹(shù)脂的主要特征：

規(guī)格	1.5 mL預(yù)裝柱
結(jié)合能力	高達(dá)1,800,000 EU/mL樹(shù)脂
配基	高效內(nèi)毒素特異吸附配基
PH范圍	pH 5-10
基質(zhì)	4%交聯(lián)的瓊脂糖凝膠
顆粒大小	80-100 µm
離子范圍	0.1-0.5M NaCl
保存溫度	2℃-8℃（勿冷凍）
使用壽命	18個(gè)月
適合純化對(duì)象	蛋白，多肽，抗體，多糖等
耐受試劑	20% DMSO，20% 乙醇，20% 甘油；0.05% 吐溫-20，10 mM DTT；1 M 尿 素；300 mM 咪唑等

 

產(chǎn)品組分

編號(hào)	組分	規(guī)格
60404-A	親和樹(shù)脂預(yù)裝柱	1.5 mL
60404-B	再生緩沖液	100 mL
60404-C	平衡緩沖液	100 mL
60404-D	流速控制器	1個(gè)
60404-E	無(wú)熱原接收管	2包（3支/包）
60404-F	無(wú)熱原槍頭（1 mL）	10包（4支/包）
60404-G	保護(hù)液（20%乙醇）	50 mL

 

運(yùn)輸儲(chǔ)存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期2年。

 

注意事項(xiàng)

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

 

使用方法

需另外準(zhǔn)備的設(shè)備與試劑

1）鐵架臺(tái)；2）3 M的NaCl、0.1M的NaOH和0.1 M的HCl，用于調(diào)節(jié)樣品pH值和離子強(qiáng)度。

 

1. 樣品處理：樣品在上樣前建議離心或用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。

實(shí)驗(yàn)中存在的若干因素都可能會(huì)影響內(nèi)毒素去除效率，如：緩沖液的pH值，內(nèi)毒素濃度，內(nèi)毒素與樹(shù)脂的接觸時(shí)間，離子強(qiáng)度，溫度以及樣品的特性等。其中樣品pH值和離子強(qiáng)度對(duì)于內(nèi)毒素的去除效率影響尤其重要，純化前可用處理過(guò)的氯化鈉，0.1 M的NaOH或0.1 M的HCl來(lái)調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度或pH值。

【注】：

① 雖然結(jié)合內(nèi)毒素的pH范圍在5-10，但是7-8的pH范圍是純化的最佳范圍。

② 合適的離子濃度可降低非特異性吸附，保持0.15-0.5 M NaCl的條件可以得到一個(gè)較好的去除效果。

 

2. 活化樹(shù)脂：將預(yù)裝柱置于鐵架臺(tái)，垂直固定，去除頂部蓋子，打開(kāi)流速控制器，使保護(hù)液在重力作用下流干，加入5 mL

再生緩沖液（預(yù)冷），調(diào)節(jié)流速控制器，保持流速在0.25 mL/min（或1滴/6s），待再生緩沖液流干后再加入5 mL再生緩沖液（預(yù)冷），再重復(fù)操作2次，確保體系保持無(wú)熱原存在。即使是第一次使用也必須進(jìn)行這一步操作。該步操作大約需要60 mins完成。

 

3. 平衡樹(shù)脂：活化完畢后加入6 mL的平衡緩沖液（預(yù)冷），沿柱管內(nèi)壁均勻加入其中，保證清洗柱管的內(nèi)壁，調(diào)節(jié)流速控制器，保持流速在0.5 mL/min（或1滴/3s），流干平衡緩沖液，再按此操作重復(fù)2次。這步操作大約需要40 mins完成。

 

4. 內(nèi)毒素去除：取1.5 mL樣品加到平衡后的層析柱中，調(diào)節(jié)流速在0.25 mL/min（或1滴/6 s），不接收流出液。當(dāng)樣品流

完，繼續(xù)添加樣品，樣品可以加滿柱管，同時(shí)收集流出液，即為除熱原的樣品。為了降低樣品的損失，樣品流完后，再添加1.5 mL平衡液，并與之前的流出液合并。檢測(cè)樣品濃度及內(nèi)毒素水平。

 

5. 再次使用：如果流出樣品內(nèi)毒素水平未能達(dá)到預(yù)期值，需要將預(yù)裝柱按照步驟2、3重新再生、平衡，然后上樣純化。

 

6. 保存條件：如果預(yù)裝柱用完后需要保存，先用5 mL平衡緩沖液（預(yù)冷）平衡柱子，待平衡液流完，加入6 mL的保護(hù)液并于4 ℃保存。

 

附表 問(wèn)題與解答

問(wèn)題	可能原因	解決方法
去除效率低	樣品與樹(shù)脂接觸時(shí)間太短	降低樣品流速，或通過(guò)低溫孵育來(lái)提高結(jié)合效率
	樣品的 pH 值沒(méi)有在內(nèi)毒素結(jié)合范圍內(nèi)	用0.1 M的NaOH或0.1 M的HCl調(diào)節(jié)pH值至7-8
	去除或檢測(cè)系統(tǒng)受到外來(lái)因素污染	使用無(wú)熱原的實(shí)驗(yàn)儀器，保證體系不受污染
	內(nèi)毒素與目的蛋白結(jié)合太牢固	① 優(yōu)化樣品的 pH 值，使它們解離； ② 增加樣品與樹(shù)脂的接觸時(shí)間
樣品損失高	樣品通過(guò)非特異性作用結(jié)合在樹(shù)脂上	增加樣品和平衡緩沖液中NaCl的含量
	目的蛋白與內(nèi)毒素結(jié)合牢固，一起結(jié)合在樹(shù)脂上	① 優(yōu)化樣品的pH值，使它們解離； ② 增加樣品與樹(shù)脂的接觸時(shí)間
樣品被污染	樹(shù)脂用于處理過(guò)其他的樣品	盡量避免使用同一個(gè)預(yù)裝柱處理不同樣品。如果無(wú)法避免，可以在處理一個(gè)樣品之后，用10-20 mL 2 M NaCl淋洗樹(shù)脂，然后再處理另外一種樣品
再生緩沖液出現(xiàn)渾濁	當(dāng)再生緩沖液達(dá)到室溫時(shí)會(huì)出現(xiàn)渾濁	使用前在冰上冷卻再生緩沖液或者在4℃條件下進(jìn)行再生

 

HB221107