產(chǎn)品說明書
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COA
已發(fā)表文獻
產(chǎn)品描述
本試劑采用獨特的裂解緩沖液體系，可以快速使細(xì)胞裂解，釋放出螢光素酶。在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，釋放出的螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中會發(fā)出波長為560 nm左右的生物熒光，該螢光可通過化學(xué)發(fā)光儀進行測定。檢測原理如圖所示：
圖1：螢火蟲螢光素酶檢測原理圖
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
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11406ES60（100 T） |
11406ES76（500 T） |
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11406-A |
細(xì)胞裂解液 |
2×30 mL |
10×30 mL |
運輸與保存方式
干冰運輸。-20℃保存，有效期1年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
實驗步驟
1.細(xì)胞
1）將細(xì)胞裂解液充分混勻，按如下方式加入細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
a: 對于貼壁細(xì)胞，吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液，按照下表比例加入細(xì)胞裂解液，輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)板使裂解液完全覆蓋細(xì)胞；
b: 對于懸浮細(xì)胞，離心棄去上清，按照下表比例加入裂解液。
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細(xì)胞培養(yǎng)板 |
96孔板 |
48孔板 |
24孔板 |
12孔板 |
6孔板 |
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裂解液加入量 |
100 μL |
150 μL |
200 μL |
300 μL |
μL |
2）冰上孵育5 min，充分裂解細(xì)胞。
3）用于熒光檢測或保存。
【注】：裂解產(chǎn)物可室溫保存6 h，4℃保存16 h，-80℃可長期存放（裂解產(chǎn)物不能多次反復(fù)凍融）。
2.葉片組織（以煙草葉片為例，僅供參考）
1）取3-4片直徑為6-8 mm的處理好的煙草葉盤，放入2 mL的 EP 管（提前放入3-4個小鋼珠）中，液氮中冷凍，使用破碎儀進行研磨破碎（45 Hz，30 s）。破碎完全后在EP管中加入100 μL裂解液。
8）冰上孵育5 min左右，充分裂解葉片。
9）10000-16000 rpm離心1 min，取上清進行熒光檢測或保存。
【注】：裂解產(chǎn)物可室溫保存6 h，4℃保存16 h，-80℃可長期存放（裂解產(chǎn)物不能多次反復(fù)凍融）。
3.原生質(zhì)體（僅供參考）
1）將重懸后的原生質(zhì)體離心收集至2 mL離心管中，加入100 μL左右的裂解液。
2）冰上孵育5 min左右，充分裂解原生質(zhì)體。
3）用于熒光檢測或保存。
【注】：裂解產(chǎn)物可室溫保存6 h，4℃保存16 h，-80℃可長期存放（裂解產(chǎn)物不能多次反復(fù)凍融）。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit輝光型螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒 |
11404ES60/80 |
100/1000 T |
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Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 輝光型雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 |
11405ES60/80 |
100/1000 T |
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11401ES60/76/80 |
100/500/1000 T |
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pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒陽性對照 |
11556ES03 |
1 μg |
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Luciferase Reporter Plasmid negative control （熒光素酶報告基因質(zhì)粒陰性對照） |
11555ES03 |
1 μg |
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pGMLR-TK Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-TK海腎熒光素酶報告基因質(zhì)粒） |
11557ES03 |
1 μg |
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pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海腎熒光素酶報告基因質(zhì)粒） |
11558ES03 |
1 μg |
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Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 |
40802ES03 |
1 mL |
HB220325
