產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
本產(chǎn)品銜接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一鏈cDNA合成步驟。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA純化的產(chǎn)物、rRNA去除的產(chǎn)物等。由于在Cat#12309中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脫mRNA純化或rRNA去除操作中所得的RNA，沒有額外的體積用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已經(jīng)溶解于Nuclease free ddH2O中，可選擇本產(chǎn)品進行RNA片段化或一鏈cDNA合成反應(yīng)。
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
8 T |
24 T |
96 T |
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11377-A |
2 × Frag/Prime Buffer |
68 μL |
204 μL |
816 μL |
運輸與保存方法
干冰運輸。-20 °C存放，有效期一年。
注意事項
1. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區(qū)域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
2. Input RNA請溶于Nuclease free ddH2O，避免Mg2+的存在干擾片段化效果；Input RNA最大投入體積為8.5 μL，在進行洗脫時請注意洗脫體積的選擇。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
使用方法
當(dāng)Input RNA不需要片段化處理時，請選擇方案A；當(dāng)Input RNA需要片段化處理時，請選擇方案B。
A1. 若Input RNA無需片段化處理，可結(jié)合Cat#12309試劑，按照表1直接配制第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系。
表1 直接進行第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系
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名稱 |
體積 (μL) |
|
Input RNA |
8.5 |
|
2×Frag/Prime Buffer |
8.5 |
|
Strand Specificity Reagent |
6 |
|
1st Strand Enzyme Mix |
2 |
|
Total |
25 |
A2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底，按照表2反應(yīng)程序于PCR儀中進行一鏈合成反應(yīng)。一鏈合成產(chǎn)物可銜接Cat#12309進行后續(xù)反應(yīng)。
表2 第一鏈cDNA合成反應(yīng)程序
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溫度 |
時間 |
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熱蓋 105 °C |
On |
|
25 °C |
10 min |
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42 °C |
15 min |
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70 °C |
15 min |
|
4 °C |
Hold |
B1. 若Input RNA需要進行片段化處理，可按照3配制片段化體系進行RNA片段化。
表3 片段化反應(yīng)體系
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名稱 |
體積 (μL) |
|
Input RNA |
8.5 |
|
2×Frag/Prime Buffer |
8.5 |
|
Total |
17 |
B2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底，根據(jù)Input RNA的完整度和實驗?zāi)康?，參?/span>Cat#12309說明書設(shè)置合適的片段化條件。
B3. 片段化產(chǎn)物進行一鏈cDNA合成，按照表4配制一鏈cDNA合成反應(yīng)體系。
表4 第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系
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名稱 |
體積 (μL) |
|
Fragmented RNA |
17 |
|
Strand Specificity Reagent |
6 |
|
1st Strand Enzyme Mix |
2 |
|
Total |
25 |
B4. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底，按照表2反應(yīng)程序于PCR儀中進行一鏈合成反應(yīng)。一鏈合成產(chǎn)物可銜接Cat#12309進行后續(xù)反應(yīng)。
HB220803
