Hieff NGS^® Novel DNA Ligation Module for kit 是針對(duì) Illumina^® & MGI^® 高通量測(cè)序平臺(tái)文庫(kù)構(gòu)建專業(yè)設(shè)計(jì)的 DNA 連接模塊，其中最大的亮點(diǎn)為本產(chǎn)品采用一款我公司自主研發(fā)的高效連接酶 Novel T4 DNA ligase。本產(chǎn)品可在雙鏈平末端 DNA 片段或雙鏈 3´-dA DNA 片段的兩端連接 Illumina^® & MGI^® 測(cè)序平臺(tái)適用的 DNA 接頭，具有連接效率高、簡(jiǎn)便、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng) 化等優(yōu)勢(shì)。本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分，都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量與功能驗(yàn)證，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

 

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品編號(hào)	組分名稱	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		12805ES24	12805ES96	12805ES98
12805-A	Novel T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL	5×1 mL
12805-B	Ligation Enhancer	720 μL	4×720 μL	30 mL

 

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸。-25~-15℃保存，有效期18個(gè)月。

 

注意事項(xiàng)

1.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2.本產(chǎn)品僅用作科研用途！

 

使用方法

1.Adapter 的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫(kù)產(chǎn)量。Adapter 用量過(guò)高可能會(huì)產(chǎn)生較多 Adapter Dimer；用量較低可 能會(huì)影響連接效率及文庫(kù)產(chǎn)量。表 1 列舉了使用本試劑盒，不同 Input DNA 量推薦的 Adapter 使用量。

表 1    500 pg-1 μg Input DNA 推薦的 Adapter 使用濃度

Input DNA	Adapter : Input DNA 摩爾比	Input DNA	Adapter : Input DNA 摩爾比
1 μg	10:1	50 ng	100:1
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	1 ng	200:1
100 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA 摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA 質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA 平均長(zhǎng)度（bp）]。

2.目前主流的合并法 DNA 建庫(kù)試劑盒，其末端修復(fù)和加 A 處理后一般不純化，直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的 商業(yè)化末端修復(fù)/加 A 體系兼容，進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請(qǐng)參考如下配制，渦旋瞬離后置于 20℃，反應(yīng) 15 分鐘即可。

表 2    Adapter Ligation 體系

名稱	體積（μL）
dA-tailed DNA	60
Ligation Enhancer	30*
Novel T4 DNA Ligase	5
DNA Adapter	5**

【注】：*對(duì)于 3.3×Fast Ligation Buffer，請(qǐng)上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時(shí)后離心使用。

**根據(jù)自身需求加入適量的接頭，本公司接頭濃度與常規(guī)商業(yè)化試劑盒一致，皆為 15 μM。

【接頭添加計(jì)算舉例】：

當(dāng) Input DNA 為 100 ng，Input DNA 長(zhǎng)度為 300 bp 時(shí)，接頭應(yīng)該添加多少？

第一步，計(jì)算 Input DNA 摩爾數(shù)。公式：Input DNA 摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA 質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA 平均長(zhǎng)度（bp）]；

Input DNA  摩爾數(shù)（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol； 

第二步，計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)注意事項(xiàng)三表 2 查詢接頭添加比例；

根據(jù)表 2，查得 Input DNA 100ng 時(shí)接頭添加比例 100:1，則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol； 

 第三步，計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù)）；

接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）；

綜上，接頭可添加 3.4 μL，加 1.6 μL 水補(bǔ)齊至 5 μL。（注：接頭最大加入體積不超過(guò) 5 μL。

 

HB230215