單克隆抗體生產(chǎn)的關(guān)鍵步驟是獲得雜交瘤細(xì)胞（hybridoma或者cell hybrids），雜交瘤細(xì)胞是骨髓瘤細(xì)胞和小鼠脾細(xì)胞融合得到的，融合后雜交瘤細(xì)胞的篩選在添加有HAT的培養(yǎng)基中進(jìn)行。HAT添加劑中氨基蝶呤（Aminopterin）通過抑制二氫葉酸還原酶3（dihydrofolate reductase 3）的活性進(jìn)而阻斷DNA 的合成，不能利用補(bǔ)救途徑（salvage pathway）合成核苷酸的細(xì)胞其生長被限制。在添加次黃嘌呤（hypoxanthine）和胸苷（thymidine）的培養(yǎng)基中，有能力合成次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase ，HPRTase）和胸苷激酶（thymidine kinase （TK））的細(xì)胞能夠利用補(bǔ)救途徑合成核苷酸。因此添加有HAT的細(xì)胞培養(yǎng)基能夠有選擇性地抑制未融合的骨髓瘤細(xì)胞或者同種細(xì)胞融合形成的雜交細(xì)胞生長，HPRTase陽性的原代脾細(xì)胞由于不能在體外培養(yǎng)環(huán)境中長期生存隨著細(xì)胞的傳代逐漸被淘汰。只有同時(shí)具備骨髓瘤細(xì)胞的“永生化”和脾細(xì)胞HPRTase/TK陽性雙重特征的雜交瘤細(xì)胞才能在添加有HAT 的培養(yǎng)基中生長。篩選過程通常延續(xù)10-14周，隨后細(xì)胞轉(zhuǎn)移到添加有hypoxanthine和thymidine 但不含aminopterin 添加劑（HT）的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)2-3周，然后轉(zhuǎn)入正常雜交瘤細(xì)胞生長所需的培養(yǎng)基中。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸，-20ºC保存。有效期2年。

注意事項(xiàng)

1.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2.本產(chǎn)品僅作科研用途！

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