單克隆抗體生產(chǎn)的關(guān)鍵步驟是獲得雜交瘤細胞（hybridoma或者cell hybrids），雜交瘤細胞是骨髓瘤細胞和小鼠脾細胞融合得到的，融合后雜交瘤細胞的篩選在添加有HAT的培養(yǎng)基中進行。HAT添加劑中氨基蝶呤（Aminopterin）通過抑制二氫葉酸還原酶3（dihydrofolate reductase 3）的活性進而阻斷DNA的合成，不能利用補救途徑（salvage pathway）合成核苷酸的細胞其生長被限制。在添加次黃嘌呤（hypoxanthine）和胸苷（thymidine）的培養(yǎng)基中，有 能力合成次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase，HPRTase） 和胸苷激酶（thymidine kinase，TK）的細胞能夠利用補救途徑合成核苷酸。因此添加有HAT的細胞培養(yǎng)基能夠有選擇性地抑制未融合的骨髓瘤細胞或者同種細胞融合形成的雜交細胞生長，HPRTase陽性的原代脾細胞由于不能在體外培養(yǎng)環(huán)境中長期生存隨著細胞的傳代逐漸被淘汰。只有同時具備骨髓瘤細胞的“永生化”和脾細胞HPRTase/TK陽性雙重特征的雜交瘤細胞才能在添加有HAT的培養(yǎng)基中生長。篩選過程通常延續(xù)10-14周，隨后細胞轉(zhuǎn)移到添加有 hypoxanthine和thymidine 但不含aminopterin 添加劑（HT）的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)2-3周，然后轉(zhuǎn)入正常雜交瘤細胞生長所需的培養(yǎng)基中。

運輸和保存方法

冰袋運輸，-20ºC保存。有效期2年。

注意事項

1.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2.本產(chǎn)品僅作科研用途！

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