Geldex 30 PG以高交聯(lián)度瓊脂糖為骨架，以交聯(lián)葡聚糖為填充，兼具葡聚糖的高選擇性和瓊脂糖的物理性能，分辨率高、硬度大、流速快，柱床隨緩沖液濃度變化小，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，非特異性吸附低，回收率高，易于放大，是精細(xì)純化階段的良好選擇。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)	高度交聯(lián)的瓊脂糖和葡聚糖
分離范圍	0.4-7 kDa (線(xiàn)性蛋白)，3-10 kDa (球蛋白)
粒徑	24-44 µm
最大耐壓	0.3 MPa
最大流速	100 cm/h
使用流速	30-50 cm/h
PH穩(wěn)定性	3~12 (工作)，1~14 (CIP，短期)
化學(xué)穩(wěn)定性	0.2 M NaOH、8 M尿素、6 M 鹽酸胍、30%異丙醇、1%SDS、 30%乙腈
滅菌	0.5 M NaOH 2 h，或者121℃ 30 min
儲(chǔ)存緩沖液	20%乙醇，4~30℃

 

運(yùn)輸和保存方法

1.使用后的Geldex 30 PG應(yīng)儲(chǔ)存于 20%乙醇中，為了防止乙醇揮發(fā)以及微生物生長(zhǎng)，建議 3 個(gè)月更換一次新鮮的20%乙醇。

2.放置在4~8℃冷庫(kù)中保存效果更好；有效期5年。

 

注意事項(xiàng)

1.凍結(jié)可能破壞介質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 

2.裝柱前最好將介質(zhì)懸液平衡到室溫。

3.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

4.本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

1 裝柱

1.1 層析柱裝填

1）根據(jù)層析柱的體積計(jì)算需要的 Geldex 介質(zhì)的量：需要的沉降體積=柱體積×1.15（即壓縮比為1.15）。

2）置換溶液，將膠懸液倒入布氏漏斗，抽去液體，并用約3倍體積的蒸餾水洗滌，（當(dāng)體積比較大或者條件不具備的時(shí)候也可以采用待膠分層后抽去上層溶液，再加入適量蒸餾水?dāng)噭?，等到分層后抽去，反?fù)3次的方法置換介質(zhì)溶液）

3）膠懸液準(zhǔn)備，加入沉降膠體積的二分之一到一倍的蒸餾水（可以加入0.1%的 Tween20可以提高裝柱的效果）攪勻備用。

4）取清洗干凈的 YXK 層析柱（YXK 系列層析柱的直徑從1 cm到 45 cm的不同規(guī)格可以滿(mǎn)足不同規(guī)模大小的層析應(yīng)用），排凈柱底膜氣泡，并在柱子底部保留1 cm高左右的水柱，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

5）將攪勻后的膠懸液一次緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時(shí)使用裝柱器），注意不要帶入氣泡，倒入后用塑料棒再次攪勻。

6）將上柱頭連接到層析系統(tǒng)或者蠕動(dòng)泵，排凈上柱頭篩網(wǎng)下面的氣泡（對(duì)于直徑小于20 cm的層析柱可以采用將柱頭翻轉(zhuǎn)向上后用蠕動(dòng)泵或者洗耳球吸去篩網(wǎng)下面的氣泡），將柱頭放入層析柱內(nèi)，晃動(dòng)柱頭使氣泡從柱頭邊緣排出，旋緊密封旋鈕（對(duì)于直徑>30 cm 的層析柱，先將密封圈不要旋的太緊，下壓軸頭讓柱體內(nèi)的液體通過(guò)柱頭反出以排出柱頭內(nèi)的氣泡，然后再旋緊密封旋鈕）。

7）按照 30 cm/h 的速度設(shè)定好流速，啟動(dòng)泵壓柱至膠面穩(wěn)定（一般在1.5~2 h）。

8）去掉裝柱器（如果有的話(huà)），重新安裝柱頭，將壓力設(shè)在0.5 MPa，采用恒壓調(diào)速的方式壓柱1 h，標(biāo)記此時(shí)的柱床高度。

9）并將柱頭壓至膠面標(biāo)記位置下面5 mm，裝柱完成。

1.2柱效評(píng)價(jià)

1）柱效測(cè)定可以采用丙酮作為指示劑或者NaCl作為指示劑，按照下表配制指示劑溶液和流動(dòng)相。

	丙酮法測(cè)柱效	NaCl法測(cè)柱效
樣品	1.0%（v/v）丙酮水溶液	0.8 M NaCl（溶于水）
樣品體積	1.0%柱體積	1.0%柱體積
流動(dòng)相	水	0.4 M NaCl水溶液
流速	20 cm/h	20 cm/h
檢測(cè)器	UV 280 nm	電導(dǎo)率

2）計(jì)算柱效： 根據(jù)UV或者電導(dǎo)率曲線(xiàn)計(jì)算理論塔板高度（HETP）、理論塔板數(shù)（N）和非對(duì)稱(chēng)因子（As）， 公式如下：

HETP=L/N ；N=5.54(VR/Wh)2

其中：VR=保留體積；Wh=半高峰寬；L=柱高；N=理論塔板數(shù)；VR和Wh的單位應(yīng)一致； As=b/a

其中：a=在10%峰高處的第一個(gè)半峰寬； b=在10%峰高處的第二個(gè)半峰寬

3）結(jié)果評(píng)價(jià)

由以上公式計(jì)算出的HETP的數(shù)值若小于三倍介質(zhì)平均顆粒大小且非對(duì)稱(chēng)因子在0.7~1.3則判定為合格（對(duì)于Geldex介質(zhì)每米的塔板數(shù)應(yīng)該大于10000）。對(duì)于不理想的柱效需要分析原因并重新裝柱。

 

2 純化流程

2.1 層析柱預(yù)處理

對(duì)層析柱進(jìn)行預(yù)處理，即采用0.1~0.5 M的NaOH對(duì)層析柱處理4小時(shí)以上以達(dá)到清洗、消毒和去除熱源的目的。

2.2 平衡

使用2~3倍柱體積的上樣平衡液平衡柱子，建議在平衡緩沖液中加入至少0.15 M的NaCl。

2.3 樣品準(zhǔn)備

樣品需要過(guò)0.45μm以下的濾膜，粘度太高時(shí)可以適當(dāng)稀釋?zhuān)鞍诐舛纫话悴怀^(guò)70mg/mL。

2.4 上樣

一般加載 0.5~2% 柱體積的樣品量，根據(jù)分離效果可以適當(dāng)調(diào)整上樣體積。 

2.5 洗脫

繼續(xù)用平衡緩沖液沖洗層析柱，收集流出的不同組分，至不再有生物分子流出，一般需要1~1.5個(gè)柱體積。

 

3 清洗與再生

（1）先用1倍柱體積的 1 M NaCl 去除。

（2）對(duì)于變性的蛋白的去除，采用 1 M NaOH以20cm/h流速?zèng)_洗2個(gè)柱體積。

（3）對(duì)于脂類(lèi)或脂蛋白的去除，用 4倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

（4）對(duì)于無(wú)機(jī)污染物的去除，采用0.5 M的醋酸沖洗2個(gè)柱體積。

（5）最后用4倍柱體積的蒸餾水沖洗。

 

                                          HB220526