產(chǎn)品簡介

 

2× Hieff^® Ultra-Long PCR Master Mix (With Dye)有經(jīng)過配體修飾的熱穩(wěn)定Taq DNA Polymerase，融合3’-5’校正活性因子以及優(yōu)化的緩沖體系，能夠擴(kuò)增長達(dá)25 kb的基因組片段、14 kb的cDNA基因序列以及40 kb的λDNA片段。Mix中已包含擴(kuò)增所需的dNTP、Mg²⁺，使用時只需加入引物和模板即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，避免了加樣過程產(chǎn)生的各種損耗，同時Mix還包含了染料部分，大大減少了后續(xù)電泳的繁瑣步驟。此外，體系中加入的保護(hù)劑使得本產(chǎn)品經(jīng)過反復(fù)凍融后仍可保持穩(wěn)定的活性。PCR產(chǎn)物的3’端帶A，可直接連接至T載體。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	10159ES03 / 10159ES08 / 10159ES50
規(guī)格	1 mL / 5×1 mL / 50×1 mL

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	10159ES03	10159ES08	10159ES50
10159-A	2× Hieff® Ultra-Long PCR Master Mix (With Dye)	1 mL	5×1 mL	50×1 mL
10159-B	25 mM MgSO4	500 μL	1 mL	5 × 1 mL
10159-C	10 mM dNTPs	100 μL	500 μL	5 × 1 mL

 

儲存條件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用說明

 

1. 推薦PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件

組分	體積 (μL)
ddH2O	to 50 μL
2× Hieff® Ultra-Long PCR Master Mix (With Dye) *	25 μL
DNA模板**	適量
Primer正向 (10 μM)	2 μL
Primer反向 (10 μM)	2 μL

表1 擴(kuò)增體系（50 μL）

 

循環(huán)步驟	溫度 (°C)	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	3 min	1
變性	98℃	10 sec	35
退火***	68℃	30 sec/kb
終延伸	72℃	10 min	1

表2 擴(kuò)增條件

 

*反應(yīng)緩沖液：緩沖液中含有2.5 mM Mg²⁺和優(yōu)化的dNTPs成分。同時試劑盒配套提供額外的MgSO₄及dNTPs，對于20 kb以上較難擴(kuò)增的片段，可嘗試添加0.5-2 mM的Mg²⁺和200-500 μM的dNTPs。

**不同模板的推薦使用量：

模板種類	片段使用量范圍（50 μL反應(yīng)體系）
基因組DNA或大腸桿菌菌液	10–1,000 ng
質(zhì)?；虿《?/font>DNA	0.5-50 ng
cDNA	1-5 µL（不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10）

表3 不同模板的推薦使用量

 

***退火/延伸：擴(kuò)增長片段建議使用兩步法進(jìn)行。退火/延伸時間設(shè)置30 sec/kb可擴(kuò)增絕大部分片段，對于20 kb以上的片段擴(kuò)增可適當(dāng)延長反應(yīng)時間，不宜超過60 sec/kb。

注意事項

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

Ver.CN20240116