2× Hieff^® Ultra-Long PCR Master Mix含有經(jīng)過配體修飾的熱穩(wěn)定Taq DNA Polymerase，融合3’-5’校正活性因子以及優(yōu)化的緩沖體系，能夠擴增長達25 kb的基因組片段、14 kb的cDNA基因序列以及40 kb的λDNA片段。Mix中已包含擴增所需的dNTP、Mg²⁺，使用時只需加入引物和模板即可進行PCR反應(yīng)，避免了加樣過程產(chǎn)生的各種損耗。此外，體系中加入的保護劑使得本產(chǎn)品經(jīng)過反復(fù)凍融后仍可保持穩(wěn)定的活性。PCR產(chǎn)物的3’端帶A，可直接連接至T載體。

 

產(chǎn)品組分

編號	名稱	10158ES03	10158ES08	10158ES50
10158-A	2× Hieff® Ultra-Long PCR Master Mix	1 mL	5 × 1 mL	50 × 1 mL
10158-B	25 mM MgSO4	500 μL	1 mL	5 × 1 mL
10158-C	10 mM dNTPs	100 μL	500 μL	5 × 1 mL

 

推薦PCR反應(yīng)體系和擴增條件

組分	體積	循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
ddH2O	to 50 μL	預(yù)變性	95℃	3 min	1
2× Hieff® Ultra-Long PCR Master Mix 1	25 μL	變性	98℃	10 sec	35
DNA模板2	適量	退火3	68℃	30 sec/kb
Primer正向 (10 μM)	2 μL
Primer反向 (10 μM)	2 μL	終延伸	72℃	10 min	1

【注】1. 反應(yīng)緩沖液：緩沖液中含有2.5 mM Mg2+和優(yōu)化的dNTPs成分。同時試劑盒配套提供額外的MgSO4及dNTPs，對于20 kb以上較難擴增的片段，可嘗試添加0.5-2 mM的Mg2+和200-500 μM的dNTPs。

2. 不同模板的推薦使用量：

模板種類	片段使用量范圍（50 μL反應(yīng)體系）
基因組DNA或大腸桿菌菌液	10-1000 ng
質(zhì)粒或病毒DNA	0.5-50 ng
cDNA	1-5 µl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10)

3. 退火/延伸：擴增長片段建議使用兩步法進行。退火/延伸時間設(shè)置30 sec/kb可擴增絕大部分片段，對于20 kb以上的片段擴增可適當反應(yīng)時間，不宜超過60 sec/kb。

 

運輸與保存方法
干冰運輸。-20℃保存，有效期1年。

 

注意事項

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

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