Cebrary? Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠腸類器官生長(zhǎng)培養(yǎng)基
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠腸類器官生長(zhǎng)培養(yǎng)基是一種無(wú)血清可應(yīng)用于小鼠腸干細(xì)胞（如腸隱窩）來(lái)源的類器官的建立和長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程，在細(xì)胞外基質(zhì)存在的條件下，培養(yǎng)基所含特有組分及豐富的細(xì)胞因子能促使腸隱窩干細(xì)胞迅速生長(zhǎng)成并形成腸類器官，類器官形成過(guò)程平穩(wěn)且迅速，同時(shí)保持較高的腸隱窩干細(xì)胞特性和活力，為后續(xù)基于類器官的腸生理功能、疾病研究和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)提供支持。
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
41426ES10 |
41426ES60 |
41426ES76 |
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41426-A |
Intestinal Organoid Growth Basal Medium (Mouse) 小鼠腸類器官生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基 |
8 mL |
80 mL |
400 mL |
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41426-B |
Nutritional components 1（10×）營(yíng)養(yǎng)組分1（10×） |
1 mL |
10 mL |
50 mL |
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41426-C |
Nutritional components 2（10×）營(yíng)養(yǎng)組分2（10×） |
1 mL |
10 mL |
50 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說(shuō)明
產(chǎn)品應(yīng)用
無(wú)菌操作條件下配制小鼠腸類器官完全培養(yǎng)基。以下是準(zhǔn)備100 mL完全培養(yǎng)基操作流程，如所需量不同，可相應(yīng)調(diào)整用量。
1. 將營(yíng)養(yǎng)組分1和營(yíng)養(yǎng)組分2室溫解凍或者2 - 8℃過(guò)夜緩融。避免反復(fù)凍融，現(xiàn)配現(xiàn)融；
2. 將基礎(chǔ)培養(yǎng)基80 mL冰箱取出恢復(fù)至室溫；
3. 將營(yíng)養(yǎng)組分1和營(yíng)養(yǎng)組分2各10 mL加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)，均勻混合；如暫不使用，短時(shí)2 - 8℃儲(chǔ)存。
4. 使用時(shí)可加入1%雙抗使用。
小鼠腸原代培養(yǎng)
- 樣本制備：小鼠斷頸處死，表面噴灑酒精殺菌。在無(wú)菌環(huán)境下截取出近胃端處3 - 15 cm腸組織，用鑷子小心去除腸道外部的腸系膜、脂肪后并放入4℃預(yù)冷的含1%雙抗DPBS溶液中。
- 樣本清洗：使用注射器沖洗腸道2 - 3次，用手術(shù)剪將腸管小心剪開(kāi)，腸腔面朝上，用手術(shù)刀片輕輕刮去腸腔表面腸絨毛，待腸絨毛被刮凈后（呈現(xiàn)組織透明），將腸組織置于新的含DPBS的培養(yǎng)皿中清洗2 - 3次。
- 樣本初處理：將清洗后的小腸組織剪碎至2 mm大小塊狀體，順勢(shì)轉(zhuǎn)移至新的50 mL離心管中，用DPBS輕柔清洗3 - 5次，除去腸絨毛細(xì)胞和漂浮脂肪組織。
- 樣本消化：在小腸碎片組織加入10 - 15 mL含有3 - 5 mM EDTA 的預(yù)冷 DPBS 中消化，4℃孵育30 min左右，期間每10 min輕搖一次離心管。
- 消化完成后，棄去EDTA消化液上清，用新的DPBS緩沖液將組織輕柔漂洗2 - 3次以去除剩余的EDTA。
- 在小腸組織碎片中加入10 - 15 mL預(yù)冷的含0.1%BSA的DPBS，反復(fù)吹打、重懸組織碎片，使隱窩與基底層分離，然后取少許懸液鏡檢，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有隱窩樣結(jié)構(gòu)后，停止吹打，并對(duì)吹打后的組織懸液使用70 μm濾網(wǎng)過(guò)濾并收集穿過(guò)濾網(wǎng)的組織懸液。
- 重復(fù)步驟5 - 6兩次，1500 rpm、4℃離心3 min。
- 混合物形成：用Ceturegel®基質(zhì)膠重懸隱窩組織沉淀，每10 μL基質(zhì)膠懸液包含200~600個(gè)隱窩，重懸后混合液置于冰上，盡快操作以避免基質(zhì)膠形成凝膠。
- 將混合懸液種植于24孔板底部正中央，每孔30 - 50 μL左右，避免懸液接觸孔板側(cè)壁。
- 將種植后的培養(yǎng)板至于37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育30min左右待Ceturegel®基質(zhì)膠凝固。
- 待Ceturegel®基質(zhì)膠完全凝固后，沿壁緩慢加入已配制好的Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠腸類器官生長(zhǎng)培養(yǎng)基，每孔800 μL直至完全浸沒(méi)混合物。
- 將24孔板置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每3天更換一次新鮮培養(yǎng)基并觀察類器官生長(zhǎng)狀態(tài)，一般小鼠小腸類器官在5~7天內(nèi)形成。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3. 產(chǎn)品的分裝、使用等操作需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行。
Ver.CN20250213
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