產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標(biāo)簽蛋白的親和層析介質(zhì)，MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊，增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10 mM麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫，保護(hù)了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續(xù)可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。此外，MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。

MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL是裝填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一種中壓預(yù)裝柱，規(guī)格1 mL，預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA等，方便客戶操作。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	20516ES03/20516ES08
規(guī)格	1 mL / 5×1 mL

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

基質(zhì)（Matrix）	高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球
配體（Ligand）	糊精
粒徑（Bead size）	45-165 µm
載量（Capacity）	>10 mg MBP蛋白（80 kDa）/mL基質(zhì)
最大壓力（PressureMax）	0.3 MPa，3 bar
pH穩(wěn)定范圍（pH range）	3-12
儲(chǔ)存緩沖液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS

 

儲(chǔ)存條件

 

2~8℃保存，有效期2年。

 

需準(zhǔn)備試劑

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾除菌。

平衡/洗雜緩沖液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH7.4

洗脫緩沖液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM 麥芽糖, pH7.4

【注】平衡/洗雜緩沖液或洗脫緩沖液中可加入1 mM DTT 或 10 mM β-巰基乙醇。

使用說明

【注】樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。

1. 樣品純化（以Akta為例）

1）準(zhǔn)備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲(chǔ)存液。

3）平衡：用5倍柱體積的平衡Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1 mL/min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測(cè)。

注：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。

5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜buffer進(jìn)行清洗，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測(cè)。

6）洗脫：用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?。也可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。

7）清洗與保存：依次使用3倍柱體積的平衡Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%乙醇中，置于2-8℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

2. SDS-PAGE檢測(cè)

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)，判定其純化效果。

3.填料清洗

MBP標(biāo)簽蛋白純化產(chǎn)品可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集，會(huì)造成流速和結(jié)合載量性能下降，這時(shí)可按照下面方法對(duì)填料進(jìn)行清洗。

1）3倍柱體積的去離子水；

2）3倍柱體積的0.1%SDS或0.1 M NaOH溶液；

3）3倍柱體積去離子水；

4）填料清洗后保存在等體積的20%乙醇中，置于2-8℃保存。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2. 所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

附表 問題及解決方案

問題	可能原因	推薦解決方案
柱子反壓過高	填料被堵塞	清洗樹脂
		裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，或離心去除
洗脫組分中無目的蛋白	目的蛋白未表達(dá)	優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案，確保目的蛋白表達(dá)
	樣品或緩沖液中存在一些干擾因素如非離子去污劑	樣品透析或用平衡buffer稀釋
	細(xì)胞產(chǎn)生大量的淀粉酶影響結(jié)合力	培養(yǎng)基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表達(dá)
	融合蛋白使麥芽糖結(jié)合位點(diǎn)阻塞或扭曲影響了目的蛋白的結(jié)合力	更換載體
	柱子結(jié)合時(shí)間太短	將樣品與樹脂振蕩孵育4℃，2h或更長(zhǎng)時(shí)間
洗脫樣品較雜	目的蛋白降解	加一些蛋白酶抑制劑，如PMSF、EDTA等
	平衡/洗雜不充分	增加平衡液體積，確保樹脂充分平衡/洗雜。

 

 

 

Ver.CN20231117