蛋白純化介質(zhì)——快速選擇高效的純化樹脂
背景描述：
對目的蛋白的功能、結(jié)構(gòu)和相互作用研究時，常常會用到蛋白純化介質(zhì)。Yeasen為您提供多種優(yōu)良的親和層析介質(zhì)，可批量或利用重力進行純化，可以高效、便捷、可靠地從您的樣品中分離蛋白和抗體，為下游應用提供良好保證。
表1 蛋白純化產(chǎn)品性能及應用
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名稱 |
性能（/mL填料） |
粒徑（µm） |
應用 |
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Ni NTA Beads |
>40mg 6XHis-tagged protein |
45-165 |
用于His標簽蛋白的純化，其配體為穩(wěn)定的四配位結(jié)構(gòu)，該產(chǎn)品可以耐受比較苛刻的化學試劑，因此，該產(chǎn)品具有較廣泛的應用范圍，可以針對包涵體和可溶蛋白的純化。 |
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Ni NTA 6FF Beads |
>40mg 6XHis-tagged protein |
45–165 |
可用于可溶蛋白和包涵體的純化，因其耐壓的骨架，可以應用于大規(guī)模蛋白純化，更容易放大規(guī)模。 |
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Glutathione Beads |
> 20mg glutathione |
45–165 |
可以用于快速純化谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的重組蛋白。具有純化效率高，樹脂載量高等特點。推薦實驗室規(guī)?？蛻羰褂?。 |
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Glutathione Beads 4FF |
~10 mg glutathione |
45–165 |
可以用于快速純化谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的重組蛋白。具有純化效率高，樹脂載量高等特點。因其耐壓的骨架，可以應用于大規(guī)模蛋白純化，更容易放大規(guī)模。 |
標簽蛋白純化的選擇
1）產(chǎn)品組成
為了有效對其蛋白樣品進行純化且進行后續(xù)的實驗探究，翌圣公司提供兩種不同的產(chǎn)品，一種是填料，一種是預裝柱。
樹脂：只要以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)而形成的用來純化蛋白的樹脂，多種樹脂供客戶選擇；
預裝柱：由樹脂和柱子配置好的成品。
樹脂 預裝柱
2）不同純化標簽的比較
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融合標簽 |
大?。╧D） |
功能 |
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HIS |
0.84 |
有利純化，能純化可溶性蛋白/包涵體蛋白 |
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GST |
26 |
增強蛋白可溶性，僅能純化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白 |
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MBP |
44.4 |
增強蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 |
3） 產(chǎn)品使用的方法
簡單三步快速純化
樣品上樣：將蛋白樣品緩慢加入到純化柱中，請注意加樣速度；
平衡/洗雜：Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收達到一個穩(wěn)定的基線。
洗脫：使用5-10倍柱體積Elution Buffer洗脫，收集洗脫液即目的蛋白溶液。
圖1蛋白純化實驗流程圖
融合標簽的分類
1）His標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂
HisSep Ni-NTA Agarose Resin以高度交聯(lián)的4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過化學方法偶聯(lián)四配位的氮川三乙酸（NTA）為配體，螯合鎳離子（Ni2+）后，形成非常穩(wěn)定的八面體結(jié)構(gòu)，鎳離子處于八面體的中心，這樣的結(jié)構(gòu)可保護鎳離子免受小分子的進攻，與Ni-IDA樹脂相比，更加穩(wěn)定，可以耐受一定濃度的還原劑、變性劑或耦合劑等苛刻條件。已經(jīng)成為實驗室純化His標簽蛋白不可或缺的樹脂之一。
產(chǎn)品特點
His-Tag本身的特性對目的蛋白無影響，不會形成二聚體；
高結(jié)合量、高流速，其載量＞40 mg 6×His-tagged protein/mL基質(zhì)，流速1 mL/min；
可與其他標簽構(gòu)建雙標前表達，可用于多種蛋白表達系統(tǒng)，純化條件溫和對蛋白 影響較小。
產(chǎn)品信息
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應用 |
貨號 |
品名 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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His標簽 蛋白純化
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20502ES10 |
10 mL |
678.00 |
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20502ES50 |
50 mL |
2848.00 |
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20502ES60 |
100 mL |
5328.00 |
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20503ES10 |
10 mL |
798.00 |
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20503ES50 |
50 mL |
3358.00 |
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20503ES60 |
100 mL |
5838.00 |
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20504ES08 |
5 mL |
728.00 |
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20504ES25 |
5×5 mL |
2938.00 |
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20505ES03 |
1 mL |
298.00 |
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20505ES08 |
HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML（His標簽蛋白純化預裝柱，1ML） |
5×1 mL |
1048.00 |
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洗脫試劑 |
20501ES60 |
100 g |
88.00 |
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20501ES76 |
500 g |
258.00 |
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60379ES76 |
500 g |
88.00 |
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60379ES90 |
5 kg |
618.00 |
2）谷胱甘肽瓊脂糖樹脂
GSTSep Glutathione Agarose Resin是一種GST標簽蛋白純化樹脂，結(jié)構(gòu)上以4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過12個原子的間隔臂，用化學方法共價結(jié)合還原型谷胱甘肽制作而成。該設計使樹脂的純化效率得到了較大提高，使其每毫升基質(zhì)可承載>20 mg GST融合蛋白。本品特異性好，性價比高，可以一步純化各種表達系統(tǒng)中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。
產(chǎn)品特點
高結(jié)合量，>20 mg GST protein/mL基質(zhì)（40 kDa）；
高流速。
產(chǎn)品信息
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應用 |
貨號 |
品名 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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GST 標簽 蛋白 純化 |
20507ES10 |
10 mL |
928.00 |
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20507ES50 |
50 mL |
3848.00 |
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20507ES60 |
100 mL |
6898.00 |
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20508ES10 |
10 mL |
1238.00 |
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20508ES50 |
50 mL |
4568.00 |
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20508ES60 |
100 mL |
7928.00 |
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20509ES03 |
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML（GST標簽蛋白純化預裝柱，1ML） |
1 mL |
328.00 |
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20509ES08 |
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML（GST標簽蛋白純化預裝柱，1ML） |
5×1 mL |
1348.00 |
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20510ES08 |
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML（GST標簽蛋白純化預裝柱，5ML） |
5 mL |
938.00 |
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20510ES25 |
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML(GST標簽蛋白純化預裝柱，5ML） |
5×5 mL |
3928.00 |
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洗脫試劑 |
60342ES10 |
10 g |
209.00 |
3）巰基蛋白瓊脂糖偶聯(lián)樹脂
SulfoLink Coupling Agarose Resin是一類預活化樹脂，其純化原理在于可以通過與巰基或者氨基的反應實現(xiàn)抗原的固定化，進而利用抗原抗體的特異性反應對免疫血清中的抗體進行高效純化，是多克隆抗體生產(chǎn)中不可缺少的純化介質(zhì)。
產(chǎn)品信息
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應用 |
貨號 |
品名 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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抗體的 純化 |
20511ES08 |
5 mL |
928.00 |
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20511ES25 |
25 mL |
2388.00 |
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20511ES60 |
100 mL |
8548.00 |
4）MBP標簽蛋白高度交聯(lián)純化樹脂
MBPSep Dextrin Agarose Resin是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標簽蛋白的親和層析介質(zhì)，MBP可促進連接蛋白的正確折疊，增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10mM麥芽糖進行溫和洗脫，保護了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續(xù)可用位點特異性蛋白酶切除。
產(chǎn)品信息
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應用 |
貨號 |
品名 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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MBP 標簽 蛋白 純化 |
20515ES08 |
5 mL |
858.00 |
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20515ES25 |
25 mL |
2958.00 |
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20516ES03 |
1 mL |
358.00 |
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20516ES08 |
5×1mL |
1258.00 |
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20517ES03 |
5 mL |
1238.00 |
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20517ES25 |
5×5mL |
3958.00 |
HB190620
