產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
Cyanine 5 TSA 酪酰胺信號(hào)放大試劑盒	60407ES03	1 kit

 

產(chǎn)品描述

酪酰胺信號(hào)放大（TSA）系統(tǒng)可用于檢測熒光免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫組織化學(xué)（IHC）和原位雜交（ISH）技術(shù)中的低豐度靶點(diǎn)，可將信號(hào)靈敏度提高100倍。TSA熒光試劑盒使用辣根過氧化物酶（HRP）直接催化固定化酶周圍的熒光基團(tuán)共價(jià)沉積，該標(biāo)記過程迅速（小于10min），沉積標(biāo)記可直接在標(biāo)準(zhǔn)或共聚焦顯微鏡下觀察。TSA試劑盒可與傳統(tǒng)染色方法結(jié)合使用用于多色成像，也可以順序進(jìn)行兩個(gè)或更多個(gè)酪酰胺反應(yīng)以標(biāo)記一個(gè)樣品上的不同靶標(biāo)。

TSA技術(shù)可用于酶綴合物和合適的生色底物的明場顯微鏡檢查，也可以與抗熒光素酶結(jié)合物組合使用。與普通實(shí)驗(yàn)相比，使用TSA試劑可顯著提高信號(hào)靈敏度，同時(shí)保持穩(wěn)定的特異性和分辨率。此外，TSA試劑盒可以顯著減少一抗或探針的消耗量。

Yeasen酪酰胺信號(hào)放大（TSA）系列產(chǎn)品包括三款試劑盒：試劑盒60405ES熒光標(biāo)記信號(hào)為fluorescein，在激發(fā)和發(fā)射波長494 nm/517 nm下顯微檢測信號(hào)；試劑盒60406ES熒光標(biāo)記信號(hào)為Cyanine 3，在激發(fā)和發(fā)射波長550 nm/570 nm下顯微檢測信號(hào)；試劑盒60407ES熒光標(biāo)記信號(hào)為Cyanine 5，在激發(fā)和發(fā)射波長648 nm/667 nm下顯微檢測信號(hào)。

本試劑盒可使用100~300 sides。

 

產(chǎn)品組分

編號(hào)	組分	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格	儲(chǔ)存條件
		60407ES03（100~300 sides）
60407-A	1X Amplification Diluent	30 mL	2~8℃，避光
60407-B	Cyanine 5 Tyramide	dry, dissolve in 60 μL DMSO	-25~-15℃，避光
60407-C	Blocking Reagent	6 g	2~8℃，避光

 

儲(chǔ)存方法

1X Amplification Diluent和Blocking Reagent，2~8℃，避光保存，有效期6個(gè)月。

Cyanine 5 Tyramide，粉末狀態(tài)，-25~-15℃保存，有效期6個(gè)月；溶于DMSO后，2~8℃，避光保存。

 

實(shí)驗(yàn)方法（僅供參考）

• 自備試劑

(1) 1× PBS（Cat#41403ES）/1×D-PBS（Cat#60152ES）

(2) DMSO（Cat#60313ES）

(3) 多聚甲醛固定液（Cat#60536ES）

(4) Triton X-100（Cat#20107ES）

(5) 改進(jìn)型檸檬酸鈉抗原修復(fù)液(50X)（Cat#36319ES）

(6) 30% H₂O₂

(7) 一抗和HRP偶聯(lián)的二抗

(8) 下列試劑僅用于 Biotin-Tyramide 系列實(shí)驗(yàn)

l 生物素封閉清洗緩沖液：含 1% BSA 和 0.05% Tween 20（Cat# 60305ES）的PBS

l 未標(biāo)記的鏈霉親和素溶液：含 0.1 mg/mL 鏈霉親和素的生物素封閉清洗緩沖液

l 生物素溶液：含 0.5 mg/mL 生物素的生物素封閉清洗緩沖液。

以下參考步驟，可用于細(xì)胞或組織切片的酪酰胺染色，每個(gè)樣品使用100 µL-300 μL 酪酰胺染色液（足以覆蓋96孔板的一個(gè)孔或約 1 cm²的組織部分），可以根據(jù)不同的樣本尺寸增加或減少酪酰胺染色液的量。

二、溶液配制

1. 酪酰胺熒光儲(chǔ)存液：組分B溶解于60 μL DMSO，配制成儲(chǔ)存液，儲(chǔ)存液置于2-8℃避光保存。

2. 酪酰胺熒光工作液：每次實(shí)驗(yàn)前，需要用組分A按照1:50-1:500的比例稀釋酪酰胺熒光儲(chǔ)存液，配置成含有0.3%的H₂O₂的酪酰胺熒光工作液（不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，稀釋比例需要進(jìn)行調(diào)整以達(dá)到最優(yōu)的結(jié)果）。每個(gè)載玻片大約需要100-300 μL的酪酰胺熒光工作液。

【注】保證配置酪酰胺熒光工作液用到的H₂O₂新鮮有效。每次實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束以后，請(qǐng)丟棄未用完的酪酰胺熒光工作液。

3. 封閉緩沖液：可取組分C按照每1g溶于100 mL含0.5% Triton X-100 的PBS中的比例，配置成封閉緩沖液。組分C的用量根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行取用，按照上述比例進(jìn)行配置即可。

三、樣本處理

1. 細(xì)胞樣本

(1) 可選：準(zhǔn)備一份陰性對(duì)照樣本（不孵育一抗的樣本）。

(2) 1×PBS清洗細(xì)胞兩次。

(3) 細(xì)胞固定：加入適量 4%多聚甲醛固定液（pH 7.4），4℃放置15min。

(4) 1×PBS清洗細(xì)胞兩次。

(5) 通透細(xì)胞：用配制于PBS中的 0.5% TritonX-100 溶液通透，室溫放置10min?；蛘呒尤氡项A(yù)冷的70%乙醇，在-20℃孵育4h。細(xì)胞能在70%乙醇中-20℃的條件下保存一周。

6. 1×PBS 清洗細(xì)胞兩次。

2. 石蠟組織切片

(1) 將石蠟切片放置在60℃的烘箱中 30min。

(2) 室溫下用二甲苯浸泡石蠟組織切片 2 次，每次 5min，以徹底脫蠟。

【注】二甲苯有毒，易揮發(fā)，請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥中操作。

(3) 室溫下，將切片樣本浸沒于無水乙醇中漂洗2次，每次5min。

(4) 室溫下，將切片樣本按照順序依次浸沒在不同濃度梯度的乙醇（95%、90%、80%、70%）中，每種濃度各漂

洗1次，每次5min。

(5) 室溫下，將切片浸沒于純水中漂洗1次，每次3min，再將切片浸沒于1×PBS 中漂洗1次，每次3min，用濾紙

小心吸干切片樣本周圍多余液體。

(6) 用鉛筆在切片樣本周圍描繪樣品輪廓，以便后續(xù)進(jìn)行通透與標(biāo)記。

(7) 抗原修復(fù)：將改進(jìn)型檸檬酸鈉抗原修復(fù)液(50X)用微波爐加熱至沸騰，將脫完蠟及復(fù)水好的片子置于緩沖液中，

間斷煮沸10min?？乖迯?fù)后取出于室溫中緩慢降溫。

【注】此過程中，玻片上組織要一直浸沒于緩沖液中，以保證組織的抗原修復(fù)效果。不同的樣本選擇不同的抗原修

復(fù)方法。

(8) 1×PBS清洗兩次。

3. 內(nèi)源性過氧化物酶滅活（可選）

加入3%過氧化氫覆蓋樣品并在室溫下孵育60min，淬滅樣品的內(nèi)源性過氧化物酶活性。

4. 內(nèi)源性生物素阻斷（可選）

進(jìn)行Biotin-tyramide/Streptavidin檢測時(shí)，建議阻斷樣品中的內(nèi)源性生物素以減少背景。對(duì)于Fluorescein/Cyanine

3/Cyanine 5 -Tyramide的試劑盒來說，可省略此步驟。

(1) 在室溫下，將樣品與未標(biāo)記的鏈霉親和素溶液一起孵育15min。之后使用生物素封閉清洗緩沖液將樣品在室溫

下洗滌3次，每次5min。

(2) 在室溫下將樣品與生物素溶液孵育30min，以封閉鏈霉親和素上多余的生物素結(jié)合位點(diǎn)。之后用生物素封閉清

洗緩沖液洗滌樣品3次，每次5min。

5. 免疫標(biāo)記

(1) 封閉：用封閉緩沖液室溫封閉1h。