膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟器官外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布最為廣泛。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成300 nm長的異源多聚體。當(dāng)用作凝膠時(shí)，膠原蛋白有助于體外培養(yǎng)并增強(qiáng)細(xì)胞特異性形態(tài)和功能的表達(dá)。膠原蛋白也可用于薄層以促進(jìn)附著，應(yīng)用包括研究腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移，單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)或分化研究，以及粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的放射自顯影研究。膠原I還用于維持肝細(xì)胞功能，分化狀態(tài)和肝細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄水平的升高等研究。

本品是來源為小鼠鼠尾，溶于0.02M HAc溶液，通過SDS-PAGE測定純度大于90 %，無菌。

 

運(yùn)輸和保存方法

4℃保存，有效期1年。不可凍存。

 

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）整個(gè)操作請于冰上進(jìn)行，因室溫下膠原蛋白I可迅速成膠。

3）整個(gè)操作請?jiān)跓o菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用說明

膠原蛋白I可凝膠到蓋玻片或組織培養(yǎng)皿上或用作細(xì)胞附著的薄膜涂層。細(xì)胞可在凝膠頂部，凝膠內(nèi)或凝膠層之間培養(yǎng)。

 

薄層包被（Thin coating）程序：

【注意】：包被濃度為5-10 µg/cm²，推薦濃度可首選5 µg/cm²。建議根據(jù)具體的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化。

1）膠原蛋白I型用0.02 M乙酸稀釋配置50 μg/ mL工作液，膠原蛋白I不溶于中性pH溶液。

2）以5 µg/cm²涂布培養(yǎng)皿，例如：一個(gè)35 mm的培養(yǎng)皿的表面積約為10 cm²，1~2 mL的工作液足以覆蓋此皿。

3）室溫孵育1小時(shí)。

4）小心吸取剩余溶液，用PBS或無血清培養(yǎng)基洗滌以除去多余乙酸。

5）組織培養(yǎng)皿包被后可立即使用，也可風(fēng)干，在2-8℃無菌條件下可貯存長達(dá)一周。

 

膠凝程序：

膠原蛋白I按以下步驟使其pH達(dá)到堿性時(shí)凝膠

1）將無菌5 cm左右的紗布海綿貼在150 mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150 mm的培養(yǎng)皿上，暫放置一邊。

2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據(jù)需要改變，膠原蛋白I（50-100 μL）足以涂覆22 mm的蓋玻片。 對(duì)于直徑100 mm的培養(yǎng)皿，每個(gè)加入約6 mL; 對(duì)于60 mm培養(yǎng)皿添加約2.3 mL，對(duì)于35 mm培養(yǎng)皿添加約1 mL。

3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。

4）在無菌蒸餾水中（35 mm培養(yǎng)皿加5 mL，60 mm培養(yǎng)皿加10 mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30 min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0 mL無菌蒸餾水，放置在層流罩中過夜。