產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是唯一一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。
本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白，多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。
目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為4種類型：膠原酶I型、II型、III型和IV型，在應(yīng)用上有所偏向：1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性）。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備；2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備；3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備；4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實驗。
本品為III型膠原酶，≥100 U/mg solid，常用于乳腺細(xì)胞和胎兒細(xì)胞的制備。
產(chǎn)品性質(zhì)
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分子量（Molecular Weight） |
68-130 kDa |
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激活劑（Activators） |
Ca2+、Zn2+ |
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抑制劑（Inhibitors） |
EDTA, EGTA,Cysteine, histidine, 2-mercaptoethanol, o-phenanthroline DTT, Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+, Not inhibited by DFP or serum |
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活力單位（Unit definition） |
在37℃，pH7.5 的條件下，5 h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1 µM L-亮氨酸的酶量定義為1個酶活力單位。 |
使用方法
1. 膠原酶儲存液的配制
向每管100 mg的膠原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡鹽溶液，含Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成100 mg/mL（即100×）的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22 μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。
2．組織的分離
1）使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4 mm大小的組織塊；
2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次；
3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4）于37℃孵育4-18 h。消化時使用水平搖床以及用3 mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。
5） 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育；
6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
7）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度。
8）于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
3． 器官灌注
1）向37℃預(yù)熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率；
2）按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；
3）將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育；
4）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
5）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度。
6）于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
運(yùn)輸和保存方法
室溫運(yùn)輸。4℃避光保存，2年有效。儲存液-20℃避光凍存。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
相關(guān)產(chǎn)品（膠原酶全類型）
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40507ES60 |
Collagenase I 膠原酶I型 |
100 mg |
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40508ES60 |
Collagenase II 膠原酶II型 |
100 mg |
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40509ES60 |
Collagenase III 膠原酶III型 |
100 mg |
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40510ES60 |
Collagenase IV膠原酶IV型 |
100 mg |
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40511ES60 |
Collagenase V膠原酶V型 |
100 mg |
其他相關(guān)產(chǎn)品應(yīng)用推薦
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應(yīng)用場景 |
名稱 |
貨號 |
主要特點(diǎn) |
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原生質(zhì)體制備 |
10404ES |
來源于蝸牛的混合酶，可降解植物細(xì)胞壁。 |
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生長調(diào)節(jié)劑 (生長促進(jìn)劑 生長延緩劑 新型植物激素） |
41001ES |
從幼嫩的玉米芯中發(fā)現(xiàn)分離出來的，促進(jìn)側(cè)芽生長，刺激細(xì)胞分化，促進(jìn)愈傷組織和種子發(fā)芽，還能防止葉片衰老。 |
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41002ES |
高純的反式玉米素，適用于植物組織培養(yǎng)。 |
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41003ES |
是一種活性高且應(yīng)用廣泛的天然合成細(xì)胞分裂素，功能上不僅促進(jìn)細(xì)胞分裂，刺激莖芽增殖，抑制根的生成，阻止葉片衰老，還能激活基因表達(dá)和代謝活性。 |
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40509ES |
適用于植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)。 |
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41004ES |
抑制幼苗生長。 |
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41012ES |
近年來發(fā)現(xiàn)的一種植物激素或其前體，能夠抑制植物的分枝和側(cè)芽的生長。 |
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抗生素 (抗細(xì)菌 抗真菌 抗性篩選）
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60230ES |
特美汀對革蘭陽性菌、陰性菌、需氧及厭氧菌的抗菌范圍甚廣。 |
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60214ES |
實驗室中應(yīng)用非常普遍：微生物學(xué)研究，細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制細(xì)菌污染，分子生物學(xué)研究 |
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60208ES |
主要對革蘭氏陽性菌有效，作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁，對人類的毒性較小。 |
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60162ES |
有效抑制多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生長，從而有效控制細(xì)胞被細(xì)菌污染。 |
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60234ES |
有效的廣譜抗菌抗生素。 |
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60206ES |
對革蘭氏陽性菌和陰性菌及支原體都有抑制作用。 |
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60231ES |
一種環(huán)狀肽、抗真菌的抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力，主要抗酵母菌。 |
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60225ES |
用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。 |
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60220ES |
將抗性基因?qū)爰?xì)胞，使其獲得對G418的耐藥性，從而用來篩選攜帶抗性基因的細(xì)胞。 |
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除草劑 |
41011ES |
對多年生的惡習(xí)性雜草如茅草、香附子、狗牙根有很好的防除效果。 |
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60221ES |
毒性低，活性高，廣譜的非選擇性除草劑，其有效成分是草丁膦。 |
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60235ES |
用于篩選含有抗性基因的基因工程細(xì)胞系，且在玉米培養(yǎng)中比草銨膦的活性強(qiáng)。 |
HB220705
