產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
蛋白電泳經(jīng)常使用聚丙烯酰胺凝膠來實現(xiàn)蛋白分離，此類凝膠一般由濃縮膠和分離膠兩部分組成，前者起到將蛋白樣品進行濃縮的作用，后者則是根據(jù)凝膠所使用的丙烯酰胺單體和N,N-亞甲基雙丙烯酰胺（甲叉丙烯酰胺）交聯(lián)劑的濃度不同從而分離不同大小范圍的蛋白質。
本試劑盒提供了配制SDS-PAGE凝膠所需的各種試劑，用戶只需自備制膠設備和蒸餾水即可配膠，大大簡化了制膠過程，貨號20328ES50可配制30-50塊常規(guī)大小的凝膠，20328ES72可配制150~250塊常規(guī)大小的凝膠。
翌圣為您提供Western Blot實驗整體解決方案，相關產(chǎn)品選購請參考：WB實驗系列產(chǎn)品-選購指南
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
保存方式 |
|
20328ES50（30~50 gels） |
20328ES72（150~250 gels） |
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20328-A |
30%丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺，29:1 |
100 mL |
500 mL |
4℃避光 |
|
20328-B |
4×Tris-HCl-SDS分離膠緩沖液，pH 8.8 |
70 mL |
350 mL |
4℃ |
|
20328-C |
4×Tris-HCl-SDS濃縮膠緩沖液，pH 6.8 |
30 mL |
90 mL |
4℃ |
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20328-D |
APS 過硫酸銨 |
0.5 g |
2.5 g |
4℃ |
|
20328-E |
TEMED 四甲基二乙胺 |
0.6 mL |
2.8 mL |
4℃避光 |
運輸和保存方法
室溫運輸。4℃避光保存，有效期12個月。
注意事項
1.丙烯酰胺溶液和TEMED有毒，請適當防護。
2. APS溶液不穩(wěn)定，當配制成10%溶液后，分裝成-20℃凍存。盡量減少室溫存放時間，以防失效。若是發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間明顯延長，需要更換使用其它-20℃凍存或者新鮮配置的10%APS。
3.TEMED易揮發(fā)，使用后請蓋緊瓶蓋。
4.凝膠凝聚的速度與溫度、光照、以及TEMED、APS的用量關系密切。在其他組分用量不變的前提下，可通過適當調(diào)節(jié)TEMED以及APS的用量，控制現(xiàn)有室溫條件下凝膠凝聚的速度?？蓞⒖几郊牧窟M行相應的調(diào)整。
5.溫度較低時，4×Tris-HCl-SDS分離膠緩沖液和4×Tris-HCl-SDS濃縮膠緩沖液中的SDS可能析出。此時需水浴溫育，并在完全溶解和混勻后使用。
6.凝膠配制過程，特別是液體混勻步驟，需盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
7.在分離膠上層進行水壓時需小心操作，加水速度不宜過快。
8.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
9.本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
1 根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度【參考附表1】
2 按照附表2配制相應濃度的SDS-PAGE分離膠，制膠程序如下：
2.1 將不同體積的30% Acr-Bis(29:1)、4×分離膠緩沖液和蒸餾水在試管或者小燒杯內(nèi)混合；
2.2 加入10% APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免氣泡產(chǎn)生；
2.3 在裝好的制膠模具中灌入適量分離膠溶液，對于mini膠，分離膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可。然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5cm的水層，從而壓平凝膠表面；
2.4 靜置30-60 min，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面，表面凝膠已聚合；
3 按照附表3配制SDS-PAGE濃縮膠，制膠程序如下：
3.1 去除覆蓋在分離膠上的水層。
3.2 將不同體積的30% Acr-Bis(29:1)、4×濃縮膠緩沖液和蒸餾水在試管或者小燒杯內(nèi)混合；
3.3 加入10% APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3.4 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。
3.5 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
3.6 靜置10-20 min，等待濃縮膠聚合。
3.7 待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
3.8 可用電泳緩沖液吹走孔內(nèi)殘留的一些膠液【可選】，然后進行上樣和后續(xù)的常規(guī)電泳操作。
附表1. 不同濃度SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍
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SDS-PAGE分離膠濃度 |
最佳分離范圍 |
|
6%凝膠 |
50-150 KD |
|
8%凝膠 |
30-90 KD |
|
10%凝膠 |
20-80 KD |
|
12%凝膠 |
12-60 KD |
|
15%凝膠 |
10-40 KD |
附表2. 不同濃度SDS-PAGE分離膠配制體系
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分離膠濃度 |
凝膠體積(mL) |
所需各組分體積（單位：mL） |
||||
|
蒸餾水 |
30% Acr-Bis（29:1） |
4×Tris-HCl-SDS分離膠緩沖液，pH 8.8 |
10% APS |
TEMED |
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|
6% |
5 |
2.7 |
1.0 |
1.25 |
0.05 |
0.004 |
|
10 |
5.4 |
2.0 |
2.5 |
0.1 |
0.008 |
|
|
15 |
8.1 |
3.0 |
3.75 |
0.15 |
0.012 |
|
|
20 |
10.8 |
4.0 |
5.0 |
0.2 |
0.016 |
|
|
30 |
16.2 |
6.0 |
7.5 |
0.3 |
0.024 |
|
|
50 |
27.0 |
10.0 |
12.5 |
0.5 |
0.040 |
|
|
8% |
5 |
2.37 |
1.33 |
1.25 |
0.05 |
0.003 |
|
10 |
4.7 |
2.7 |
2.5 |
0.1 |
0.006 |
|
|
15 |
7.1 |
4.0 |
3.75 |
0.15 |
0.009 |
|
|
20 |
9.5 |
5.3 |
5.0 |
0.2 |
0.012 |
|
|
30 |
14.2 |
8.0 |
7.5 |
0.3 |
0.018 |
|
|
50 |
23.7 |
13.3 |
12.5 |
0.5 |
0.030 |
|
|
10% |
5 |
2.03 |
1.67 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
|
10 |
4.07 |
3.33 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15 |
6.1 |
5.0 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20 |
8.1 |
6.7 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
30 |
12.2 |
10.0 |
7.5 |
0.3 |
0.012 |
|
|
50 |
20.3 |
16.7 |
12.5 |
0.5 |
0.020 |
|
|
12% |
5 |
1.7 |
2.0 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
|
10 |
3.4 |
4.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15 |
5.1 |
6.0 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20 |
6.8 |
8.0 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
30 |
10.2 |
12.0 |
7.5 |
0.3 |
0.012 |
|
|
50 |
17.0 |
20.0 |
12.5 |
0.5 |
0.020 |
|
|
15% |
5 |
1.2 |
2.5 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
|
10 |
2.4 |
5.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15 |
3.6 |
7.5 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20 |
4.8 |
10.0 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
30 |
7.2 |
15.0 |
7.5 |
0.3 |
0.012 |
|
|
50 |
12.0 |
25.0 |
12.5 |
0.5 |
0.020 |
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附表3. 5% SDS-PAGE濃縮膠配制體系
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凝膠體積（mL） |
所需各組分體積（單位：mL） |
||||
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蒸餾水 |
30% Acr-Bis（29:1） |
4×Tris-HCl-SDS濃縮膠緩沖液，pH 6.8 |
10% APS |
TEMED |
|
|
2 |
1.14 |
0.34 |
0.5 |
0.02 |
0.002 |
|
4 |
2.28 |
0.68 |
1.0 |
0.04 |
0.004 |
|
6 |
3.42 |
1.02 |
1.5 |
0.06 |
0.006 |
|
8 |
4.56 |
1.36 |
2.0 |
0.08 |
0.008 |
相關產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
|
4×Tris-HCl-SDS Separating Gel Buffer, pH8.8 （4×Tris-HCl-SDS分離膠緩沖液，pH8.8） |
20320ES76 |
500ml |
|
4×Tris-HCl Separating Gel Buffer, pH8.8 4×Tris-HCl分離膠緩沖液, pH8.8 |
20321ES76 |
500ml |
|
4×Tris-HCl-SDS Stacking Gel Buffer, pH6.8 （4×Tris-HCl-SDS濃縮膠緩沖液， pH6.8 ） |
20322ES76 |
500ml |
|
4×Tris-HCl Stacking Gel Buffer, pH6.8 4×Tris-HCl濃縮膠緩沖液, pH6.8 |
20323ES76 |
500ml |
|
20324ES62 |
125 mini gels |
|
|
20325ES62 |
125 mini gels |
|
|
20326ES62 |
125 mini gels |
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|
20327ES62 |
125 mini gels |
HB220531
