產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
胰蛋白酶（Trypsin）是一種普遍發(fā)現(xiàn)于脊椎動物消化系統(tǒng)的絲氨酸蛋白酶，能水解蛋白，以無活性的胰蛋白酶原（trypsinogen）的形式分泌于胰腺中。其切割肽鏈的位點主要位于賴氨酸或精氨酸的羧基端（二者緊接脯氨酸的情況除外）。胰蛋白酶包括兩個亞基，α亞基（有2個多肽鏈構(gòu)成）和β亞基（有1個多肽鏈構(gòu)成）。其水解活性可被多種抑制劑抑制，包括：1）有機磷化合物，如氟磷酸異丙酯；2）來源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制劑；3）銀離子；4）特定蛋白酶抑制劑，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK等；
本品是來源于豬胰腺的胰蛋白酶凍干粉，經(jīng)γ射線處理滅活病毒，酶活≥ 250 units/mg。廣泛用于細(xì)胞傳代，將貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)板上消化水解下來制備單細(xì)胞懸液，常用的工作濃度是0.25-5%（w/v）。
產(chǎn)品性質(zhì)
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中文別名（Chinese synonym） |
胰蛋白酶，豬胰臟來源； |
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英文別名（English synonym） |
Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme; Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858; |
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CAS號（CAS NO.） |
9002-07-7 |
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分子量（Molecular weight） |
23.8 kDa |
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外觀（Apperance） |
白色至類白色粉末 |
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消光系數(shù)（Extinction coefficient） |
E1%280=14.3 |
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等電點（Isoelectric Point） |
pH 10.5 |
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溶解性（Solubility） |
溶于水，幾乎不溶于乙醇和甘油 |
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比活力（Specific activity）* |
＞250 U/mg |
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*活力定義（Unit definition）：The activity causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm. |
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運輸和保存方法
冰袋運輸。凍干粉2~8℃干燥保存，有效期2年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）胰蛋白凍干粉產(chǎn)品常遇到的活性定義及其轉(zhuǎn)換，
1 BAEE U：在25℃，pH 7.6 的條件下，以BAEE為底物，3.2 mL的反應(yīng)體系中，A253吸光值每分鐘會發(fā)生0.001的變化即為一個胰蛋白酶酶活單位。
1 TAME U：在25℃，pH 8.2，0.001 M的Ca2+的條件下，每分鐘水解 1 μM的TAME 的樣品量。
1 USP U：在指定條件下，每分鐘引起吸光值發(fā)生0.003的變化的樣品活性。
1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法（用于貼壁細(xì)胞的消化）
1. 胰酶濃縮液（0.25%）的配置
稱取0.25 g胰酶粉末溶于100 mL HBSS（無鈣，鎂）緩沖液，并調(diào)整pH在7.4-7.6范圍。此時得到的即0.25%胰酶濃縮液，置于4℃短時間保存，3個月相對穩(wěn)定。建議分裝凍存，利于長期保存。解凍后可能會出現(xiàn)少量沉淀，屬于正常現(xiàn)象，不會影響其使用效力。
【注】凍干粉也可溶于其他不含鈣鎂離子的平衡鹽緩沖液如PBS。
細(xì)胞的消化可以直接用胰酶溶液，但通常使用的是胰酶-EDTA溶液，因為EDTA是一種II價金屬離子螯合劑，能夠螯合鈣鎂離子，減少細(xì)胞間的粘附性，從而增強胰酶的活性。
2. 胰酶-EDTA溶液的配制(0.25%(w/v))：
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無Ca2+、Mg2+及酚紅的平衡鹽溶液 |
To 500 mL |
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胰蛋白酶 |
1.25 g |
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EDTA |
0.10 g |
3. 貼壁細(xì)胞的消化
方法一
1）移除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，用不含Ca2+、Mg2+的緩沖液清洗單層貼壁細(xì)胞，直至清除殘余血清，吸除鹽溶液。
2）向上述貼壁細(xì)胞中加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液，至完全覆蓋細(xì)胞即可。
3）傾斜培養(yǎng)板，吸取胰酶-EDTA溶液，反復(fù)吹洗細(xì)胞數(shù)次，注意消化時間不可過長。
【注】消化時間跟細(xì)胞類型、細(xì)胞密度、所用血清濃度、胰酶活性、以及消化前細(xì)胞培養(yǎng)時間有關(guān)。
4）將細(xì)胞于室溫孵育直至細(xì)胞分離，期間可將細(xì)胞培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察，避免細(xì)胞過度消化，從而避免胰酶對細(xì)胞造成的損傷。
5）加入10 mL細(xì)胞培養(yǎng)液，輕輕反復(fù)吹吸從而將細(xì)胞從培養(yǎng)板底盡可能吹離，吹洗時盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
6）進行下一步操作或?qū)⒓?xì)胞凍存。
【注】操作時務(wù)必小心謹(jǐn)慎，同時時刻注意避免交叉污染發(fā)生的可能性。
方法二
以25 cm2 T-Flask為例，
1）無菌條件下吸除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液。
2）加入3 mL冰的胰蛋白酶-EDTA溶液（配方同上）。
3）孵育30 s（或更長，如果需要）。置于低倍鏡觀察，如果有部分細(xì)胞開始變圓脫離培養(yǎng)瓶壁，此時可吸除胰酶溶液，繼續(xù)孵育至細(xì)胞完全脫落。
4）加入10 mL新鮮MEM培養(yǎng)液，可用槍快速的將培養(yǎng)液加入，有助于使細(xì)胞脫落；然后使用相同的槍頭，輕輕地多次吹洗細(xì)胞并混勻后，吸取其中5 mL于一個新的培養(yǎng)瓶中。
5）置培養(yǎng)條件下孵育。
HB230224
