產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品簡介
Dispase II，中文名分散酶II，一種非特異性金屬蛋白酶，細(xì)胞生物學(xué)中常用于從不同的組織或器官分離單細(xì)胞，并用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)，如原代細(xì)胞的分離，細(xì)胞傳代等。另外，Dispase II還可用于消除懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細(xì)胞聚集。與其他細(xì)胞生物學(xué)常用蛋白酶（如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等）相比，該酶具有以下優(yōu)勢：1）一種快速有效且溫和的細(xì)胞消化酶，對細(xì)胞損傷小，且能維持細(xì)胞膜完整性；2）來源于細(xì)菌，無支原體或其他動物病毒污染；3）穩(wěn)定性強(qiáng)，不受溫度、pH及血清組分的影響；4）可用于多種類型組織和細(xì)胞的分離等。
本品非無菌Dispase II，來源于Bacillus polymyxa，使用時需對其除菌處理，用于細(xì)胞培養(yǎng)時常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
40104ES60 / 40104ES80 |
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規(guī)格 |
100 mg / 1 g |
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比活性（Specific Activity） |
≥0.8 U/mg (+37℃, casein as substrate, pH 7.5) |
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單位定義（Unit Definition） |
在溫度37℃、pH值為7.5的條件下，每分鐘水解酪蛋白釋放出相當(dāng)于1 µM(181 µg)酪氨酸的福林陽性氨基酸和肽所需要的酶量，即為一個蛋白酶活性單位，以U表示。 |
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最佳pH（pH Optimum） |
6.0-8.5 |
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抑制劑（Inhibitors） |
EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金屬離子。血清不會抑制dispase活性。 |
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激活劑（Activator） |
Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+濃度為2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其處于最佳活性。 |
儲存條件
凍干粉4℃保存，保質(zhì)期2年。儲存液于4℃可穩(wěn)定保存2周，若長期保存，請分裝后于-20℃凍存。避免反復(fù)凍融。
使用說明
1 母液及工作液配制
1）用50 mM HEPES-KOH緩沖液(pH 7.4, 150 mM NaCl)（60165ES）溶解適量本品凍干粉，配制成10 mg/mL的儲存液，用0.22 µM濾膜過濾除菌。
2）使用時用適當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)液將上述儲存液稀釋到工作液濃度即可，用于細(xì)胞分離時其常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
【注】不推薦使用高于2.4 U/mL的工作濃度。
2 組織的解離
1）用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊；
2）用無菌PBS清洗組織塊；
3）向上述組織塊中加入Dispase II溶液（工作濃度為0.6-2.4 U/mL），并確保組織塊全部浸沒于Dispase 溶液中。
4）37℃孵育，孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離?！咀ⅰ咳舻谝淮问褂迷撁?，可通過細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織，1h即可達(dá)到分離目的，但更長時間（如數(shù)小時）的孵育也不會明顯影響細(xì)胞活性。
5）如有需要，可將上述消化產(chǎn)物通過無菌不銹鋼網(wǎng)篩過濾，以分開單細(xì)胞與殘留的組織塊?；蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細(xì)胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進(jìn)一步解離殘留組織。
6）離心沉淀細(xì)胞，倒掉酶溶液；
7）用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。
3 細(xì)胞傳代
1）利用Dispase 溶液（37℃預(yù)熱）浸沒細(xì)胞，于37℃孵育5 min；
2）吸除上述溶液，繼續(xù)于37℃孵育10 min；
3）顯微鏡下觀察細(xì)胞分離情況，如需要，可進(jìn)一步孵育15 min；
4）利用細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，輕輕旋轉(zhuǎn)使得細(xì)胞沉淀并用培養(yǎng)基清洗細(xì)胞；
5）換用新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，并按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞鋪板。
注意事項(xiàng)
- 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
- 本產(chǎn)品僅作科研用途！
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產(chǎn)品名稱 |
主要作用 |
產(chǎn)品貨號 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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水解蛋白，廣泛用于細(xì)胞傳代，將貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)板上消化水解下來制備單細(xì)胞懸液。 |
40101ES25 |
25 g |
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水解蛋白，用于組織和單層細(xì)胞的解離。 |
40127ES60 |
100 mL |
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配制 Dispase II 儲存液，也常用作制備蛋白裂解液的基礎(chǔ)溶液。 |
60165ES60 |
100 mL |
Ver.CN20241120
